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摘要 目的：通过Beagle犬长期灌胃给药，考察芒果苷的长期毒性，为临床安全用药的剂量设计提供参考。方法：芒果苷以0.2，1.0，0 g/kg剂量灌服给予Beagle犬，对照组给予0.5%CMC-Na。给药1次/d，连续1个月。测体重、体温1次/周，并根据体重调整给药量。于给药前、给药结束和恢复结束时进行眼科检查、心电图分析、尿液分析，并采血进行血液、血液生化学、血液电解质、血凝等检测，给药结束时各组取4只犬麻醉后取骨髓涂片检查，然后放血处死，进行系统尸解和组织病理学检查。给药结束后各组剩余2只犬停药，常规喂2周，进行可逆性和延迟毒性观察。结果：在给药期间，给药犬粪便颜色加深，但粪便形状、排便次数、排便量均正常；其余外观体征、行为活动、腺体分泌、摄食情况等无明显异常。芒果苷连续给予Beagle 1犬1个月：犬体重增长正常，各给药组在各时点对对照组比较，差异均无统计学意义（ P >0.05）；犬心率G波、PR间期、QRS间期、QT间期、ST段偏移量均正常，各给药组在各时点与对照组比较，心率差异无统计学意义（ P >0.05）；血液学各指标均正常；血液生化学各指标均正常。无论给药前，还是给药后，各犬左右两眼曲光介质透明度、视网膜、血管、视乳头均基本正常，未见有供试品引起的明显改变。芒果苷连续给予Beagle犬1个月，与对照组比较，给药犬骨髓增生活跃，粒系细胞与红系有核细胞比例正常，粒系及红系各阶段细胞比例未见异常，淋巴系和巨核细胞系亦无特殊，属正常骨髓象；各给药组在各时点与对照组比较，骨髓各类细胞均无明显异常。芒果苷连续给予Beagle犬1个月及停药恢复2周，与对照组比较，给药犬脏器重量及系数基本正常，各给药组在各时点与对照组比较，高剂量组在给药结束时睾丸和附睾重量和系数均明显高于对照组，差异有统计学意义（ P <0.05）。结论：芒果苷连续给药1个月和停药恢复2周，各给药组均有一些散在病變发生，但病变特征没有共性，也未见有剂量-毒性关系，且部分改变也见于对照组，未发现在供试品剂量范围，因供试品导致的Beagle犬的特征病变和毒性靶器官，给药剂量与药时曲线下面积呈正相关，长期经口给予芒果苷于Beagle犬体内显露无蓄积倾向。Beagle犬安全剂量上限范围为4 g/kg，为人临床拟推荐剂量的127倍。因此，按临床拟推荐剂量用药应是比较安全的。
关键词 芒果苷；长期毒性；大鼠
Safety Evaluation of Mangiferin Extracted from Mango Leaf—Long-term Toxicity Test
Hao Erwei1，2，Wang Qin1，Tan Zhenyuan3，Wang Zhengyi4，Deng Jiagang1，2
（1 Guangxi Key Laboratory of Efficacy Study on Chinese Materia Medica，Nanning 530200，China； 2 Guangxi Collaborative Innovation Center for Functional Ingredients Study of Agricultural Residues，Nanning 530200，China； 3 Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530021，China； 4 Sichuan Institute of Natural Medicine，Chengdu 610041，China）
Abstract Objective： To study long-term toxicity of mangiferin and to provide reference for the safety dose of clinical drugs. Methods： Mangiferin was given to Beagle dogs at a dose of 0.2 g/kg，1 g/kg and 4 g/ kg.The control group was given 0.5% CMC-Na once a day，lasting 1 month.To measure body weight once a week，body temperature 1 times，and adjust the dosage according to body weight.The blood，blood biochemistry，blood electrolytes，blood clotting and other tests were performed at the end of administration.Also，the blood samples were collected at the end of the administration.After given anesthesia，take bone marrow smear，and then bleeding dogs to death for autopsy and histopathological examination.At the end of the administration，the remaining 2 dogs in each group were routinely fed for 2 weeks to observe reversibility and delayed toxicity. Results： During the period，the color of the dogs was deepened，but their stool shape，defecation frequency and defecation volume were normal.Other signs including behavioral activities，glandular secretion and feeding did not change obviously. Results： Showed that there was no significant difference between the control group and the experiment group at each time point.The dog heart rate G wave，PR interval，QRS interval，QT interval，ST segment offset were normal.At each time point，compared with the control group，heart rate were of no significant difference，hematology indicators were normal and blood biochemical indicators were normal in the treatment groups.Before and after treatment，eyes light media transparency，retina，blood vessels，optic papilla are basically normal in all groups，and no significant changes was caused by the test sample.Mangiferins were given to Beagle dogs for 1 month，and compared with the control group，the bone marrow hyperplasia was active，the proportion of granulocytes and erythroid nucleated cells，the proportion of granulocytes and erythrocytes，megakaryocyte cell line are all normal.Compared with the control group，bone marrow cells were with no significant abnormalities in all treatment group.Mangiferins were given Beagle dogs for 1 month and recovered for 2 weeks.Compared with the control group，the weight and coefficient of the organs in the treatment group were normal at each time point.The weight and coefficient of testes and epididymis were significantly higher than those of the control group at the end of the experiment （ P <0.05）. Conclusion： Mangiferin was administered continuously for 1 week and stopped for 2 weeks.There were some scattered lesions in the treatment group，but the lesion was not common and no dose-toxicity relationship was observed.In the control group，it was found that the dose and the target organ of Beagle dogs caused by the test product were positively correlated with the area under the curve，and the long-term oral administration of mangiferin showed a tendency to accumulate in Beagle dogs.The Beagle dogs have a maximum dose limit of 4 g / kg，which is 127 times higher than the clinical recommended dose.Therefore，clinical recommended dose should be safe.
Key Words Mangiferin； Long-term Toxicity； Rat
中圖分类号：R285.5 文献标识码：A doi： 10.3969/j.issn.1673-7202.2017.07.049
芒果苷（Mangiferin）是芒果叶（ Mangifera indica L.）中的主要活性成分，是一种天然多酚类化合物，具有广泛的药理活性，主要集中在抗炎、解热、镇咳、免疫调节、抗病毒、及抗肿瘤作用等方面[1-7]。对于芒果苷的毒性研究一直未见报道，课题组对芒果苷的毒性进行了系统的评价，本文主要介绍芒果苷长期毒性评价的结果。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 动物 Beagle犬，普通组，雌雄各半，年龄5～6个月，体重6.00～7.55 kg；供应单位：广东省高要市康达实验动物科技有限公司；质量合格证号：粤检证字2005A030；生产许可证号：SCXK（粤）2004-0009。
1.1.2 药物 芒果苷，广西中医药大学提供，纯度94%，批号：20070828。
1.1.3 试剂与仪器 血液生化试剂，由利德曼科技有限公司提供；血象试剂，由上海东湖仪器试剂科技有限责任公司提供。血凝试剂，由西安交大开元生物科技开发有限公司提供；电解质试剂，由深圳航创医疗设备有限公司提供；尿试剂由拜耳诊断生产有限公司提供。全自动生化仪（日本TOKYO BOEKI公司）；血液细胞自动分析仪（日本光电公司）；血凝仪（培康医疗电子有限公司）；电解质仪（深圳航创医疗设备有限公司）；多道生理记录仪（成都仪器厂）；尿分析仪（拜耳公司）。
1.2 方法[8-15]
1.2.1 动物分组与给药 Beagle犬按体重、性别随机分为4组，每组6只，雌雄各半，分别为对照组及芒果苷低、中、高剂量组。芒果苷配制成不同浓度药液后，按0.2，1，4 g/kg剂量灌服给予Beagle犬，对照组给予0.5%CMC-Na，给药1次/d，连续1个月。
1.2.2 观测指标与方法
一般症状、体重观察：每日观察Beagle犬外观体征、行为活动、腺体分泌、粪便情况、摄食量等。观察期2次，开始给药后每周测定体重1次。
心电图：首次给药前（观察适应期）测2次，给药结束和恢复结束时各测1次，共计4次。检测心率、T波振幅、P-R间期、QRS间期、Q-T间期、S-T偏移量。
血液学指标：首次给药前（观察适应期）测2次，给药结束和恢复结束时各测1次，共计4次。检测红细胞（RBC）、白细胞及分类（WBC，DC）、血小板（PLT）、血小板压积（PCT）、血红蛋白（HGB）、血细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均血红蛋白量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、网织红细胞（Ret）、中性粒细胞（N）、淋巴细胞（L）、嗜酸性粒细胞（E）、嗜碱性粒细胞（B）、单核细胞（M）、凝血酶原时间（PT）。
血液生化学指标：首次给药前（观察适应期）测2次，给药结束和恢复结束时各测1次，共计4次。检测两氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血糖（GLU）、尿素氮（Urea）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（TBIL）、肌酐（Crea）、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、肌酸激酶（CK）、γ-谷氨酰转移酶（GGT）、钾离子浓度（K+）、钠离子浓度（Na+）、氯离子浓度（Cl-）。
眼科检查：首次给药前（观察适应期）测2次，给药结束和恢复结束时各测1次，共计4次。检测眼睛分泌物、视网膜、视网膜血管、视神经乳头、曲光介质透明度。
骨髓检查：活体抽取犬骨髓涂片染色镜检。给药结束和恢复结束时各测1次，共计2次。检测巨核细胞系、粒细胞系、单核细胞系、红细胞系、有核细胞增生程度、巨核细胞数。
脏器重量及脏器系数：给药结束和恢复结束时各测1次，共计2次。检测脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫。
组织病理学检查：给药结束和恢复结束时各测1次，共计2次。检测脑、视神经、垂体、心、肝、脾、肺肾、肾上腺、脊髓、胸腺、胃、胰腺、大肠和小肠、膀胱、淋巴结、甲状旁腺、坐骨神经、唾液腺、主动脉、睾丸、附睾、前列腺、卵巢、子宫、乳腺、气管、咽、喉、支气管、食管、胸骨、胆囊、眼等脏器病理变化。
1.3 统计学方法 心电图、血液学检查、血液生化学检查、脏器重量及脏器系数等用SPSS统计软件分析，组间比较采用方差分析，尿液指标采用秩和检验。以 P <0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 芒果苷对Beagle犬一般症状、体重的影响
在给药期间，给药犬粪便颜色加深，但粪便形状、排便次数、排便量均正常。其余外观体征、行为活动、腺体分泌、摄食情况等无明显异常。芒果苷连续给予Beagle 1犬1个月，犬体重增长正常，各给药组在各时点对对照组比较，差异均无统计学意义（ P >0.05）。
2.2 芒果苷对Beagle犬心电图的影响
芒果苷连续给予Beagle犬1个月，犬心率G波、PR间期、QRS间期、QT间期、ST段偏移量均正常，各给药组在各时点与对照组比较，心率差异均无统计学意义（ P >0.05）。见表1。
2.3 芒果苷对Beagle犬血液学的影响
芒果苷连续给予1个月，各血液学各指标均正常；给药组在各时点与对照组比较，差异均无统计学意义（ P >0.05）。见表2～4。
2.4 芒果苷对Beagle犬血液生化学的影响
芒果苷连续给予1个月，与对照犬比较，血液生化学各指标均正常；各给药组在各时点与对照组比较，差异均无统计学意义（ P >0.05）。见表5～7。
2.5 芒果苷对Beagle犬眼科检查的影響
无论给药前，还是给药后，各犬左右两眼曲光介质透明度、视网膜、血管、视乳头均基本正常，未见有供试品引起的明显改变。停药恢复2星期后，也未见以上各指标有明显改变。
2.6 芒果苷对Beagle犬骨髓检查的影响 芒果苷连续给予Beagle犬1个月，与对照组比较，给药犬骨髓增生活跃，粒系细胞与红系有核细胞比例正常，粒系及红系各阶段细胞比例未见异常，淋巴系和巨核细胞系亦无特殊，属正常骨髓象；各给药组在各时点与对照组比较，骨髓各类细胞均无明显异常。见表8～9。
2.7 芒果苷对Beagle犬脏器重量及脏器系数的影响
芒果苷连续给予Beagle犬1个月及停药恢复2周，与对照组比较，给药犬脏器系数基本正常；各给药组在各时点与对照组比较，高剂量组在给药结束时睾丸和附睾系数明显高于对照组，差异有统计学意义（ P <0.05），其余各组与对照组比较，异均无统计学意义（ P >0.05）。见表10～11。
3 讨论
Beagle犬连续给予芒果苷1个月或停药恢复2周，笼旁观察见给药犬粪便颜色加深，但停药后即恢复正常。给药结束时，高剂量组睾丸和附睾脏器重量和脏器系数均明显高于对照组；病理检查发现，给药结束时所有雄性犬睾丸发育良好，曲细精管生上皮细胞并未见明显异形性；但高剂量组部分睾丸曲精管内可见条形的精子生成，而对照组、低剂量组、中剂量组睾丸曲精管内看不到条形的精子生成；恢复结束时各组镜下未见睾丸组织结构有明显异常；无论是给药结束时还是恢复结束时，镜下均未见附睾组织结构有异常改变。恢复结束时低剂量组1例脾脏囊性病变，低倍镜下见脾脏局部被膜下有数个囊肿，囊腔内充满红色浆液，高倍镜下见囊肿壁有正常脾索构成。恢复期结束时低剂量组1例肾脏镜下观察见局部肾间质增生，慢性炎性细胞浸润，部分肾小管扩张，诊断为局灶性间质肾炎。其余体重、体温、眼科检查、血液学、血液生化学、心电图、尿液、骨髓等指标未见有供试品引起的异常变化。
芒果苷连续给药1个月和停药恢复2周，各给药组均有一些散在病变发生，但病变特征没有共性，也未见有剂量-毒性关系，且部分改变也见于对照组，未发现在供试品剂量范围，因供试品导致的Beagle犬的特征病变和毒性靶器官，给药剂量与药时曲线下面积呈正相关，长期经口给予芒果苷于Beagle犬体内显示无蓄积倾向。Beagle犬安全剂量上限范围为4 g/kg，此剂量为人临床拟推荐剂量的127倍。因此，按临床拟推荐剂量用药应是比较安全的。
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