[摘要]目的：探讨自体脂肪干细胞的浓缩提取技巧及在面部填充治疗中的远期效果和安全性。方法：2013年-2017年对38例颜面部凹陷或组织缺容的就医者行自体脂肪干细胞移植填充矫治，术后随访评价矫治效果。结果：38例就医者中，有33例接受了1次自体脂肪干细胞移植，5例进行了再次自体脂肪干细胞移植。术后随访时间为3～41个月，术后颜面部缺容及轮廓欠佳现象获得显著改善。未出现局部硬结、皮肤表面不平整、注射针孔瘢痕及色素沉着等不良反应。术后就医者和医师对效果的总有效率评价分别为94.7%和97.4%。结论：自体脂肪干细胞移植是一种安全、远期疗效理想的面部年轻化治疗方式，严格遵照医疗规范及实验室提取脂肪干细胞的提取方法操作，可以有效提高脂肪干细胞的移植成活率。
[关键词]自体脂肪干细胞;凹陷填充;面部缺容;面部年轻化;注射
[中图分类号]R622 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2019）08-0022-03
面部轮廓是否分明丰满，除了骨骼因素以外，主要由面部皮下脂肪而定。一般来说，青少年至中年人群面部皮下脂肪丰满，随着年龄增长或因某些疾病甚至外伤导致面部皮下脂肪减少，显得消瘦凹陷，从美学角度来说显得老态或给人以沧桑感，这给爱美人士带来了烦恼，自体脂肪移植修复可以让消瘦或凹陷的脸庞恢复圆润曲线，同时让面部轮廓整体提升，显年轻化[1]。2013年-2017年，无锡市第二中医院医学美容外科对38例就医者应用自体脂肪干细胞行面部凹陷填充及轮廓修饰等面部年轻化的综合矫治，取得了满意的临床疗效。现报道如下。
1 资料和方法
1.1 临床资料：本组共38例就医者，其中女性34例，男性4例，年龄27～55岁，平均36.3岁;均已排除高血压、冠心病等慢性病，排除面部皮肤感染（如痤疮等），排除正在减肥者。其中33例接受了一次自体脂肪干细胞移植，5例接受了第二次脂肪干细胞移植。
1.2 器材设备：正压洁净台—SW-CJ-2FD，高速冷冻离心机—TD5.5，冷冻生理盐水。
1.3 方法
1.3.1 自体脂肪的提取：根据就医者主观要求及自身条件，选择上臂、腹部及大腿内侧、外侧作为供区并标记抽取脂肪的范围[2]。常规供区肿胀麻醉，用0.9%生理盐水500ml+2%盐酸利多卡因40ml+肾上腺素1ml配成局麻肿胀液，用11号刀片在标记抽吸部位做3～5mm皮肤切口，选用2.8mm直径的注水针，将一只手放在抽吸部位皮肤表面，可感觉到针的定位及肿胀程度，在标记抽吸供区范围内均匀注射至肿胀发白，皮肤有“橘皮样”外观为止[3]。结束注射，轻按摩术区至肿胀液扩散均匀。麻醉成功后，用20ml注射器与4mm吸脂针沿切口插入皮下脂肪组织，吸脂针呈扇形均匀抽取深层脂肪，至足够量。
1.3.2 脂肪干细胞的提取与浓缩：①将吸出来脂肪液连同注射器放入4℃～8℃生理盐水中直立静置3～5min，混合液为不同颜色的3层，上层为橘红色的脂肪液体，中间层为淡黄色脂肪颗粒，下层为粉红色的肿胀液和血液的混合液;②然后取出排去底层液体（转移至正压洁净台操作），把上两层脂肪液及脂肪颗粒转移至50ml离心管内，放入冷冻（4℃）离心机，400r/min离心2min，取出离心管，此时离心管出现两层（见图1），上层为淡黄色脂肪，底层为淡红色肿胀液，用注脂针抽去底层肿胀液（见图2）;③将获得纯脂肪颗粒转移至50ml注射器内，再经过双通脂肪乳糜器（见图3），分别经3孔、5孔、9孔乳糜器将脂肪颗粒反复推送，直至脂肪完全乳糜粉碎。然后按每25ml乳糜脂肪加入23ml冰生理盐水+2ml庆大霉素转移至离心管内混匀，再置于冷冻离心机，以2 500r/min，离心5min;④离心后离心管内出现4层，最顶层为油脂性液体，第二层为破碎脂肪碎片及部分脂肪细胞及淋巴细胞，第三层为生理盐水，管底一层为脂肪干细胞及少量红细胞（见图4）。吸去顶层破碎脂肪油脂，再吸去第三层生理盐水，在吸去过程中动作要轻缓（50ml可濃缩提取7ml左右，见图5）;⑤将留下乳糜脂肪及底层干细胞转移至20ml注射器内，把获得乳糜脂肪按每15ml加入庆大霉素4U国际单位，2%利多卡因3ml，用两个注射器通过三通反复推送混匀（见图6）。
1.3.3 自体脂肪干细胞面部注射移植：就医者术前坐立位标记移植部位与范围，根据缺容量用记号笔由疏至密的虚线标记。局部麻醉后，尽量在隐蔽部位用19G锐针刺破表皮，再用21G钝针（圆头）接于1ml注射器，在真皮下及骨膜上游离松解粘连，形成多个线状腔隙。进针动作轻柔，以最小的压力缓慢注射，注射前回抽观察有无回血，避免进入血管，以退针注射方式进行注射，精确控制注入的脂肪量，注射部位的即时效果比周围不移植部位略为饱满即可，同时遵循注射量宁少勿多原则，一般注射量多于所需量的20%。同时注意区域之间的衔接，过渡要平缓自然[4]。注射后24h内轻柔按摩及适当冰敷，以使注射脂肪分布均匀。24h后禁持续按摩及热敷，以免脂肪液化。
1.3.4 术后处理：供区用运动弹力胶布包扎3～5d，根据抽取脂肪量的多少、部位及范围来决定是否需要穿塑身衣。颜面注射部位用小二退热贴，避免局部挤压及做夸张表情。预防性口服抗生素3d。
1.4 效果评估：评价标准遵循就医者要求外，还遵循黄金分割定律、三庭五眼等规律，遵照对称、均衡、和谐、完整等原则。术后4～6周就医者、医师及手术组护士结合术前标准照片进行对比评价，总有效率=（效果一般+效果理想）例数/总例数×100%。
2 结果
本组共38例就医者，单次脂肪干细胞移植总量为18～62ml，术后缺容及轮廓明显改善。术后早期主要是瘀青肿胀，多数在5～7d左右消退，上睑处及下睑处相对消退较慢，个别患者就医者需要2～3周方能全部消退。围手术期未出现血肿及感染，未见脂肪液化及栓塞，注射针孔未见瘢痕及色素沉着，恢复自然，未见表情僵硬及局部硬结，未出现并发症。大多数就医者1次移植后效果满意，个别就医者对疗效不满意，于3个月后行第2次脂肪干细胞移植，从实验室复苏冻存脂肪干细胞，直接注射移植。就医者及家属评价有效率为94.7%，医师及护士评价有效率为97.4%，具体情况见表1。
3 典型病例
3.1 病例1：女，31岁，身高166cm，体重52kg。面部缺容特征：颞部凹陷、眉心部不饱满，侧面颊部凹陷，鼻基底及下眶骨缘凹陷扁平，面部整体轮廓不流畅，行自体脂肪干细胞移植，总共注射43ml脂肪干细胞。术后3个月自觉颞部不够理想，行第2次自体脂肪干细胞移植，同时就医者为追求美感，要求丰下颏，于下颏处注射1.5ml脂肪干细胞，一共注射13ml，两次注射总量为56ml。面部立体感增强，面部轮廓流畅，显年轻化。术后随访41个月，见图7。
3.2 病例2：男，29岁，身高176cm，体重73kg。面部缺容特征：颞部、颊部凹陷。行自体脂肪干细胞移植，双侧颞部总注射量为18ml，术后5个月复诊，自觉效果比较理想。面部轮廓流畅，较前年轻化。术后随访9个月，见图8。
4 讨论
4.1 自体脂肪间充质干细胞及其临床应用概述：面部组织随着年龄的增长，会产生皮肤松弛、皮下胶原蛋白减少、脂肪颗粒减少、筋膜松弛、肌肉体积减少及弹性降低等现象，会出现软组织容积减少，造成骨骼显形，脸型由年轻时的“类鹅蛋形”变成“类菱形”，因组织减少及松弛缘故，面部轮廓呈现上小下大的椭圆形。随着人们对美的追求，医疗美容技术的日臻完美，自体脂肪间充质干细胞逐渐应用于临床。作为一种自体组织及可再生的填充材料，具有来源丰富、取材方便、操作简单、仿生自然、安全无排异、预后效果好等优点[5-7]。自体脂肪间充质干细胞移植不仅在改善面部轮廓方面发挥作用，而且还因为脂肪本身含有大量的细胞生长因子、抗自由基及抗氧化功能，再加上间充质干细胞具有多分化潜能，能根据组织需要主动归巢，促进组织修复，具有改善皮肤组织光泽度，修复受损肌肤等起到抗衰作用。脂肪干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs）具有多分化潛力，不仅能形成表皮细胞、骨和软骨细胞、干细胞，还能分化形成心肌细胞、神经细胞、血管内皮细胞和血细胞等，在组织再生、组织器官修复方面也有着巨大潜力[8-10]。目前，自体脂肪移植已经成为安全、效果持久、用途广泛的抗衰老微创外科方式。人体脂肪组织中除了含有已经定型的前脂肪细胞外，也包含具有多项分化潜能的细胞群—脂肪间充质干细胞[11-12]。
4.2 如何提高自体脂肪干细胞移植的成活率：由于自体脂肪移植后存在一定程度的吸收率。临床观察，根据就医者的年龄、移植部位、移植体积及个体差异，自体脂肪吸收率约30%～90%，平均超过60%，如何减少移植后的吸收及预后效果成为脂肪干细胞移植的技术关键[13-14]。笔者结合在实验室工作中脂肪干细胞的提取与培养体会总结如下：未分化的脂肪干细胞多数都存在于脂肪内外壁、脂肪组织筋膜等临近组织中。采用冷冻离心能更好地保护脂肪干细胞的成活，低速短时间的第1次离心能很好保护细胞不被清洗离心掉。反复的双通脂肪乳糜器过滤式破壁具有很好的粉碎脂肪颗粒的作用，能最大限度地把干细胞暴露出来，再经过高速离心，能很好地把脂肪干细胞沉淀下来。干细胞辅助脂肪移植，能够分化为脂肪细胞，补充因损伤而减少的脂肪细胞数量，实现脂肪再生;同时可分化为血管内皮细胞，促进血管新生及血供恢复;通过旁分泌作用，释放血管源性生长因子，调整组织局部微循环境等[15-17]。
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[收稿日期]2018-12-05
本文引用格式：张若冰，谢惠明，张杰.自体脂肪干细胞的浓缩提取及在面部填充中的应用效果[J].中国美容医学，2019，28（8）：22-25.