彭学文 陶 月 詹云达 解文强 吴志会
（唐山市农业科学研究院，河北唐山 063001）
灰树花Grifola frondosa，又名舞茸，属担子菌亚门 Basidiomycotina、层菌纲 Hymenomycetes、多孔菌目 Polyporales、皱孔菌科 Meruliaceae、树花菌属Gri⁃fola，是一种珍稀食药用菌[1−2]。灰树花营养丰富，含18 种人体必需的氨基酸和多种有益矿物质，有医疗保健作用，是一种优良的食药用菌[3−4]。当前灰树花的市场需求量逐年上升，但唐山市迁西县灰树花栽培品种较单一，加上菌种退化等因素的影响，导致灰树花产量下降。为此，笔者开展野生灰树花菌株驯化研究，旨在筛选适合迁西县气候的优质、高产灰树花菌株，并为灰树花育种提供种质资源。
1.1 试验材料
（1）供试菌株：试验对照菌株为迁西3 号，庆灰151。
供试野生菌株6 株，均为唐山市农业科学院食用菌研究所实验室野外采集分离获得。详见表1。
表1 供试野生灰树花菌株
（2）供试培养基：PDA 加富固体培养基为去皮马铃薯200 g，葡萄糖20 g，硫酸镁1 g，磷酸二氢钾1 g，琼脂20 g，pH 自然；
栽培料配方为栗木屑40%，棉籽壳42%，麸皮16%，红糖1%，石膏1%，料水比为1∶0.8，pH自然。
图1 部分野生灰树花子实体生态照
1.2 试验方法
1.2.1 供试灰树花菌株拮抗试验
将供试菌株两两组合，接种于PDA 平板培养基，25 ℃黑暗培养，观察菌丝接触区有无拮抗反应。3次重复。如果检测菌株间无带线出现，表示2个菌株间亲缘关系较近，需要采用其他方法进一步鉴定。如果检测菌株间出现拮抗（拮抗线或隆起或沟状），表示两菌株间亲缘关系较远。
1.2.2 供试灰树花菌株在PDA平板上菌丝生长情况
图2 部分灰树花菌株拮抗情况
将对照菌株和野生菌株转接到PDA 培养基上活化，于25 ℃恒温暗培养15 d，用打孔器取直径为5 mm 菌饼接种到新PDA 培养基中央，置25 ℃恒温暗培养。培养11 d 后观察菌落生长情况，并采用“十”字交叉法测量菌落直径，每处理设4个重复。
试验计算菌丝平均生长速度，观察记录菌丝长势。
菌丝生长速度=（[菌落直径−菌饼直径）/2]÷11
1.2.3 供试灰树花菌株出菇比较试验
栽培袋（17 cm×36 cm×0.005 cm）装湿料1 kg（折干0.55 kg），100 ℃灭菌12 h 后冷却，中心轴接种颗粒菌种。发菌期管理同常规，出菇采用迁西县当地常规模式地栽覆土出菇。每个菌株栽培3 畦，每畦36袋（菌棒）。
试验记录菌丝生长情况包括菌丝满袋时间，接种到子实体形成时间，测定子实体性状。
2.1 供试灰树花菌株拮抗试验结果
由表2可知，8个灰树花菌株间两两组合均发生拮抗反应，说明供试8个灰树花菌株亲缘关系较远。
表2 供试灰树花菌株拮抗试验结果
2.2 供试灰树花菌株菌丝在PDA平板上生长情况
由表3可知，试验灰树花菌株菌丝颜色均洁白；
从菌丝长势、菌落形态来看，都均匀，庆灰151 菌株菌丝较稀疏，95 号、96 号、98 号、100 号、101 号菌株菌丝生长旺盛；
从菌丝平均生长速度来看，96 号菌株生长速度较慢，且与 88 号、95 号、迁西 3 号、庆灰151菌株差异显著，生长速度最快的是庆灰151菌株（4.74 mm/d），其次是迁西3号菌株、88号菌株。
表3 供试灰树花菌株PDA平板培养菌丝生长情况
2.3 供试灰树花菌株出菇试验结果
由表4 可知，接种到菌丝满袋时间最短的是迁西3 号菌株（22 d），其次是88 号菌株、98 号菌株，满袋用时最长的是庆灰151 菌株、95 号菌株。接种到子实体形成时间最短的是迁西3 号、96 号菌株、98号菌株（均为48 d），100号菌株时间最长（为54 d）。
表4 供试灰树花菌株子实体特性
子实体形态及颜色，所有菌株都是莲花状，但迁西3号菌株、庆灰151菌株、88号菌株、95号菌株、96 号菌株、100 号菌株色深；
叶片大小，96 号菌株、100 号菌株叶片较大，但96 号菌株子实体属于中等大小，子实体最大的为101 号菌株，其次是迁西3 号菌株。由表5 可知，产量最高是迁西3 号菌株，514.3 g/袋，其次是 101 号菌株，508.0 g/袋，但两者没有显著差异。
表5 供试灰树花菌株产量比较
拮抗试验表明，所采集野生灰树花菌株与对照迁西3 号及庆灰151 均有拮抗，且野生灰树花菌株之间也有拮抗，下一步将通过ISSR 和SRAP 进一步鉴定他们之间的亲缘关系。供试灰树花菌株出菇试验结果，101 号菌株产量较高，但是颜色浅，96 号菌株生物转化率为90.96%，较迁西3 号稍低，叶片较大，色深，适合鲜销，具有一定的市场前景。
图1 部分供试灰树花菌株子实体
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