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【摘要】目的：探讨不同苏木素染液在小组织取材标记中的应用。方法：小组织充分固定，随机分成A、B、c三组，分别滴入o.5%醇溶性伊红染液、0.1% Lillie-Mayer氏和o.1%Mayer氏苏木素染液，相同脱水程序处理，观察组织辨识度及染色情况。结果：A组着色浅、不易辨识、对比不明显，HE染色正常;B组着色深、对比明显，但有苏木素结晶，HE染色背景偏灰;C组着色适中、易辨识、对比明显，HE染色正常。结论：Mayer氏苏木素染液应用于组织取材标记可获得较理想效果。
【关键词】取材标记;小组织;苏木素;Mayer
【中图分类号】R452.1
【文献标识码】B
【文章编号】1002-8714（ 2019） 03-0072-01
在病理日常工作中，每天取材都会遇到许多小组织，组织经过脱水处理后，会进一步收缩变小、透明，给后续的包埋、切片带来一定困难。因此，行业内推荐小组织取材时宜采用伊红液滴染组织[1]，使组织着色，便于在包埋和切片时清晰辨识，避免遗漏。然而，按照规范采用中性缓冲福尔马林固定组织时[2]，伊红着色困难，且在延长固定时伊红洗脱严重，其标记效果不佳。作者尝试用多种不同的苏木素染液来替代伊红，发现不需要变更其他技术流程，Maver氏苏木素即可获得理想的组织标记效果。
1 材料与方法
1.1材料收集惠州市第一人民医院的内镜活检小标本共30例，包含鼻咽镜、肠镜和胃镜标本，将其随机分成A、B、C三组，每组各10例。所有标本均经10%中性缓冲福尔马林固定。
1.2试剂0.5%醇溶性伊红染液、0.5%改良Lillie-Mayer氏苏木素染液、0.1%Mayer氏苏木素染液，以上试剂全部购自广州市维格斯生物科技有限公司。其中0.5%Lillie-Mayer氏苏木素染液经蒸馏水稀释至0.1%质量体积浓度。
1.3方法内镜标本固定4-6小时后取出，A、B、C三组分别滴入0.5%醇溶性伊红染液、0.1%改良Lillie-Mayer氏苏木素染液、0.1%Mayer氏苏木素染液1滴，用包埋纸包好，相同脱水程序处理后，严格按照规范完成包埋、切片及HE染色[3]。
2 结果
脱水处理后，A组组织着色较浅，不易辨识，包埋后组织与石蜡对比不明显，HE染色结果正常;B组组织着色较深，包埋后组织与石蜡对比明显，但包埋纸上有较多苏木素结晶，影响包埋辨识，HE染色背景偏灰;C组组织着色适中，容易辨识，包埋后组织与石蜡对比明显，HE染色结果正常（图1）。
3 讨论
组织标本经甲醛固定后均会失去原有的颜色，固有结缔组织、纤维细胞及腺体等经甲醛固定后呈灰白色或灰黄色[4]，与包埋用的石蠟颜色较接近，不易辨识。尤其是内镜活检标本，取材组织数量少、体积小，包埋和切片时难于辨识，容易出现漏包埋、切片过深或过浅的问题，存在一定的医疗风险[5]，故而大部分医院取材时会采用0.5%醇溶性伊红来标记组织（A组）。然而，组织经中性缓冲福尔马林固定后呈中性或弱碱性，其pH值大于蛋白质等电点，此时蛋白质表现为酸性电离，伊红亦属于酸性染料，不易染色[6]。因此，我们尝试使用属于碱性染料的苏木素来标记小组织，将Maver氏和Lillie-Maver氏苏木素调整至O.1%质量体积浓度，对比发现，两种苏木素均能使活检组织较好着色，包埋后组织与石蜡对比明显。但是，Lillie-Maver氏苏木素的氧化度较高，容易出现苏木素结晶，对包埋有一定干扰影响。同时，Lillie-Mayer氏苏木素染色属于退行性染色，取材时用其标记组织后，长时间浸泡于中性福尔马林中，使组织染色加深（返蓝效果），按照正常HE染色流程完成染色时，因盐酸分化不足，导致切片略有灰染背景。Mayer氏苏木素染色则属于进行性染色，组织染色后不需要再做其他处理[7]，没有明显结晶生成，容易辨识，对HE染色也没有影响。
综上所述，应用Mayer氏苏木素染液于组织取材标记可以获得较理想效果，标记的组织脱水处理后着色适中，容易辨识，包埋后组织与石蜡对比明显，对后续HE染色没有影响。
参考文献
[1]范钦和主编病理科建设管理规范与操作常规[M]南京：东南大学出版社，2006：22
[2]中华医学会临床技术操作规范病理学分册[M]人民军医出版社，2004： 27
[3]杨清绪主编病理学技术与管理[M]北京：人民卫生出版社，2016：20-43
[4]全国卫生专业技术资格考试专家委员会病理学技术[M]北京：人民卫生出版社，2015：390-391
[5]马恒辉，周晓军组织固定处理及包埋常见问题及对策[J]临床与实验病理学杂志，2015. 31（6）：638-641.
[6]梁英杰，凌启波，张威.临床病理学技术[M].北京：人民卫生出版社，2011： 65-75
[7]彭瑞云，李杨现代实验病理技术[M].北京：军事医学科学出版社，2012：67-80