[摘要] 采用正反相硅胶，Sephadex LH-20，MCI树脂等常规柱色谱及高效液相色谱技术对中药木蝴蝶种子80%甲醇提取物进行化学成分的分离纯化，从中分离得到11个化合物，根据其理化性质以及核磁波谱数据鉴定化合物结构为木蝴蝶苷 B（1）、白杨黄素（2）、黄苓苷元（3）、5，6-二羟基-7-甲氧基黄酮（4）、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（5）、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（6）、2α，3β-二羟基羽扇豆醇（7）、羽扇豆醇（8）、顺式-连翘环己醇（9）、β-谷甾醇（10）、豆甾醇（11）。其中，化合物5为首次从木蝴蝶中分离得到。
[关键词] 木蝴蝶;提取分离;结构鉴定;化学成分
[收稿日期] 2014-12-19
[通信作者] *王开金，教授，硕士生导师，研究方向为天然产（药）物化学，E-mail： wkjahla@163.com
[作者简介] 翟翔宇，硕士， E-mail：zhaixiangyu2007@126.com
Study on chemical constituents from seed of Oroxylum indicum
ZHAI Xiang-yu1，2， XIAO Wei1，2， YANG Biao1，2， MENG Zhao-qing1，2， WANG Zhen-zhong1，2，
HUANG Wen-zhe1，2， WANG Kai-jin3*
（1. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co.， Ltd.， Lianyungang 222001， China;
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process， Lianyungang 222001， China;
3. Anhui University， School of life sciences Anhui， Hefei 230601， China）
[Abstract] Oroxylum indicum was a traditional Chinese medicine. In order to study the chemical constituents from the seed of O. indicum， the chemical constituents of 80% methanol extract of seeds of O. indicum were subjected to chromatography on silica gel， Sephadex LH-20， and preparative HPLC， leading to the isolation of eleven compounds. The structures were identified by various spectroscopic data including ESI-MS， 1H-NMR and 13C-NMR data as oroxin B（1）， chrysin（2）， baicalein（3）， neglectein（4）， quercetin-3-O-β-D-galactopy ranoside（5）， quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside（6）， 2α，3β-dihydroxylluPeol（7）， lupeol（8）， rengyol（9）， β-sitostero（10），and stigmasterol（11）. Among them， compound 5 were firstly obtained from O. indicum.
[Key words] Oroxylum indicum; extraction and isolation; structure determination; chemical constituents
doi：10.4268/cjcmm20151519
木蝴蝶是一种常用中药，是紫葳科植物木蝴蝶的干燥成熟种子，于《滇南本草》被首次载入，原名为千张纸，《本草纲目拾遗》开始正式命名为木蝴蝶[1]。性味苦、甘凉，有清肺、利咽、止咳、舒肝、和胃的功效，还有抗炎抗菌、抗病毒、抗氧化、抗白内障等作用。有研究表明，木蝴蝶提取物对人乳腺癌细胞的增殖、扩散具有抑制作用[2-4]。木蝴蝶用法可以煎服、研末服用或外用敷贴，可与甘草，胖大海等合用，以复方的形式治疗喉炎和口腔溃疡[5]。国内主要用种子入药，其主要活性成分是黄酮及其苷类化合物，如黄芩苷元、白杨黄素、槲皮素、木蝴蝶苷A和木蝴蝶苷B等[6]。为了寻找活性化合物，为该植物的进一步开发利用提供科学依据，作者从10 kg木蝴蝶种子中分离得到11个单体化合物，其中包括：2个三萜化合物：2α，3β-二羟基羽扇豆醇（7）和羽扇豆醇（8）;2个甾体化合物：β-谷甾醇（10）和豆甾醇（11）; 1个连翘环己醇：顺式-连翘环己醇（9）;6个黄酮及其苷类：木蝴蝶苷 B（1）、白杨黄素（2）、黄苓苷元（3）、5，6-二羟基-7-甲氧基黄酮（4）、槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（5）、槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（6）。其中，化合物5为首次从木蝴蝶种子中分离得到。
1 材料
LC3000型高效液相色谱仪（北京创新通恒科技有限公司）; ZF-I型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）;Bruker AM-400型超导核磁共振仪;VG Autospec-3000型质谱仪;柱色谱硅胶（200～300目，青岛海洋化工）;Bruker AM-400型超导核磁共振仪;手提式高速药物粉碎机;上海爱朗仪器有限公司生产的BUCHI旋转蒸发仪;Sephadex LH-20（Pharmacia公司）;MCI（75～150 μm， Mitsubishi Chemical Co.）;薄层色谱硅胶（青岛海浪硅胶干燥剂厂）;硅胶（200～300目青岛海浪硅胶干燥剂厂）;硅胶板H（青岛海浪硅胶干燥剂厂）;荧光板HSGF254（烟台江友硅胶开发有限公司）;制备型薄层色谱板[自制备，固定相采用GF254（HG/T2354-2010）硅胶和羧甲基纤维素钠（800～1 200）制备分别为青岛海洋化工有限公司和天津市光复精细化工研究所];自制超纯水;化学纯溶剂（乙醇、甲醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、石油醚和氯仿等）;显色剂（10%硫酸乙醇）。
木蝴蝶种子药材购自安徽亳州药材市场，经安徽大学王开金教授鉴定为木蝴蝶种子，标本现存于中安徽大学生命科学学院植物标本室，标本号为ADZ120812。
2 提取分离
取干燥木蝴蝶种子10 kg，粉碎后用8倍量体积80%甲醇回流提取，提取3次。浓缩回收甲醇得到木蝴蝶粗提物800 g。每次取400 g粗提物，超声震荡使其充分悬浮于2 L纯化水中，依次使用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对悬浊液等体积萃取，每部分萃取3次，得到3个部位，即石油醚部分（150 g），乙酸乙酯部分（280 g）和正丁醇部分（220 g）。
经检测乙酸乙酯部分与正丁醇部分相似度较大，合并后经硅胶柱色谱纯化，以氯仿-乙酸乙酯系统进行梯度洗脱（50∶1～1∶1），最后用纯甲醇冲柱。收集流份经 TLC 色谱分析后合并浓缩，得到4个组分A～D 4个组分。D组分经MCI柱色谱纯化，以水-甲醇系统梯度洗脱（0～50%），再经Sephadex柱色谱柱（纯甲醇系统）纯化后得到化合物9;C部分经硅胶柱色谱（氯仿-乙酸乙酯50∶1～5∶1），分别收集，经Sephadex柱色谱纯化（纯甲醇系统）后得到淡黄色针状结晶化合物3、化合物1和化合物4（1， 3， 4经硫酸乙醇显色均为黄色）;B组分经MIC色谱纯化，以水-甲醇梯度洗脱（10%～100%），得到大量黄色棱柱状结晶，将结晶挑出，清洗，重结晶后得到化合物2;A组分经MCI柱色谱，以水-甲醇为洗脱系统，（10%～100%），再经Sephadex柱色谱纯化（纯甲醇系统）得到化合物5～7。
石油醚部分经硅胶柱色谱纯化，以石油醚-乙酸乙酯为系统（石油醚-乙酸乙酯 100∶1～1∶1），经 TLC 色谱分析后合并浓缩，得到3个组分E～G。E组分继续经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯 100∶1～10∶1）后，得无色结晶化合物10和化合物11; G组分经硅胶柱色谱（石油醚-乙酸乙酯 50∶1～1∶1）得白色粉末化合物8。
3 结构鉴定
化合物1 黄色粉末;ESI-MS m/z 597. 4[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ：7.01（1H，s，H-3），7.15（1H，s，H-8），7.63（3H，d，J=8.0 Hz，H-5），8.11（2H，d，J=4.0 Hz，H-2，6），8.52（1H，s，6-OH），12.60（1H，s，5-OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ： 163.3（C-2），104.6（C-3），182.5（C-4），146.9（C-5），130.8（C-6），148.9（C-7），94.5（C-8），151.2（C-9），106.1（C-10），130.8（C-1），126.3（C-2，6），129.3（C-3，5），132.0（C-4），103.8（C-1），73.6（C-2），76.9（C-3），69.7（C-4），75.6（C-5），69.2（C-6），100.9（C-1），73.2（C-2），77.2（C-3），70.3（C-4），75.7（C-5），61.2（C-6）。核磁数据与文献[7]报道一致，鉴定其为木蝴蝶苷B（oroxin B）一致。
化合物2 黄色棱柱型晶体;ESI-MS m/z 255.3[M+H]+。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz） δ： 6.14（1H，s，H-6），6.43（1H，s，H-8），6.86（1H，s，H-3），7.49（3H，d，J=8.0Hz，H-3，4，5），7.96（2H，d，J=8.0Hz，H-2，6）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz） δ： 163.1（C-2），105.1（C-3），181.8（C-4），161.4（C-5），99.0（C-6），164.4（C-7），94.0（C-8），157.4（C-9），103.9（C-10），130.7（C-1），126.3（C-2，6），129.0（C-3，5），131.8（C-4）。核磁数据与文献[8]报道一致，鉴定其为白杨黄素（chrysin）。
化合物3 黄色针状晶体，分子式为C15H10O5。1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ： 6.63（1H，s，H-8），6.93（1H，s，H-3），7.57（3H，m，H-3，4，5），8.06（2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6），9.66（1H，s，7-OH），8.78（1H，s，6-OH），12.65（1H，s，5-OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ： 153.7（C-2），104.5（C-3），182.1（C-4），149.9（C-5），129.1（C-6），162.9（C-7），94.0（C-8），146.9（C-9），104.3（C-10），131.8（C-1），126.3（C-2），129.1（C-3），131.0（C-4）。核磁数据与文献[8]报道一致，鉴定其为黄苓苷元（baicalein）。
化合物4 黄色粉末;1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz） δ： 6.90（1H，s，H-8），6.94（1H，s，H-3），7.56（3H，d，J=8.0Hz，H-3，4，5），8.05（2H，d，J=8.0 Hz，H-2，6），8.77（1H，s，6-OH），12.50（1H，s，5-OH）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz） δ： 182.3（C-4），163.10（C-7），154.6（C-2），149.8（C-5），146.1（C-9），131.9（C-1），130.8（C-4），130.1（C-6），129.1（C-3，5），126.3（C-2，6），105.3（C-10），104.6（C-3），91.2（C-8），56.3（C-7-OMe）。核磁数据与文献[9]报道一致，鉴定其为5，6-二羟基-7-甲氧基黄酮（neglectein）。
化合物5 淡黄色粉末; 1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz）δ： 5.38（1H，d，J=8.0 Hz，H-6），6.18（1H，s，H-6），6.40（1H，s，H-8），6.81（1H，d，J=8.0Hz，H-5），7.52（1H，d，J=2.0Hz，H-2），7.67（1H，dd，J=8.5，2.1Hz，H-6），12.64（1H，s，5-OH），3.20～3.70（6H，m）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz）δ： 156.2（C-2），133.5（C-3），177.5（C-4），161.2（C-5），98.7（C-6），164.3（C-7），93.5（C-8），156.34（C-9），103.9（C-10），122.0（C-1），115.2（C-2），144.8（C-3），148.50（C-4），115.9（C-5），121.1（C-6），101.8（C-1），71.2（C-2），73.2（C-3），67.9（C-4），75.8（C-5），60.1（C-6）。核磁数据与与文献[10]报道一致，鉴定其为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（hyperoside）。
化合物6 黄色粉末; 1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ： 6.45（1H，s，H-6），6.74（1H，s，H-8），6.88（1H，d，J=8.0 Hz，H-5），7.66（1H，d，J=8.0 Hz，H-6），7.75（1H，s，H-2），5.05（1H，d，J=8.0 Hz，H-1），3.19～3.70（6H，m）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ： 147.6（C-2），136.4（C-3），175.8（C-4），160.6（C-5），98.5（C-6），162.7（C-7），93.5（C-8），155.8（C-9），104.5（C-10），120.1（C-1），115.9（C-2），147.8（C-3），145.3（C-4），115.2（C-5），122.0（C-6），98.7（C-1），73.2（C-2），76.3（C-3），69.4（C-4），77.3（C-5），60.4（C-6）。核磁数据与文献[11]报道一致，鉴定其为槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside）。
化合物7 白色粉末;1H-NMR（DMSO-d6，400 MHz） δ： 3.603（1H，m，H-2），2.92（1H，d，J= 9.6 Hz，H-3），2.37（1H，m，H-19），4.55（1H，s，Ha -29），4.68（1H，s，Hb-29），1.64（3H，s，H-30）。13C-NMR（DMSO-d6，100 MHz） δ： 39.1（C-1），67.3（C-2），82.2（C-3），38.6（C-4），54.8（C-5），17.7（C-6），34.2（C-7），40.3（C-8），49.7（C-9），37.5（C-10），21.1（C-11），25.0（C-12），37.7（C-13），42.4（C-14），28.6（C-15），35.1（C-16），42.5（C-17），47.7（C-18），47.4（C-19），150.2（C-20），29.2（C-21），40.4（C-22），28.6（C-23），17.1（C-24），16.9（C-25），15.7（C-26），14.3（C-27），18.00（C-28），109.7（C-29），18.9（C-30）。核磁数据与文献[12]报道一致，鉴定其为2α，3β-二羟基羽扇豆醇（2α，3β-dihydroxyllupeol）。
化合物8 白色粉末;1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ： 2.36（1H，m，H-19），4.56（1H，s，Ha -29），4.68（1H，s，Hb -29），1.67（3H，s，H-30）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz） δ： 39.0（C-1），28.1（C-2），78.3（C-3），40.1（C-4），55.4（C-5），18.4（C-6），34.4（C-7），40.9（C-8），50.5（C-9），37.3（C-10），21.0（C-11），25.2（C-12），38.1（C-13），43.1（C-14），27.5（C-15），35.7（C-16），42.9（C-17），48.4（C-18），48.1（C-19），151.1（C-20），30.3（C-21），40.4（C-22），28.5（C-23），14.7（C-24），16.2（C-25），16.1（C-26），15.8（C-27），18.1（C-28），109.5（C-29），19.4（C-30）。核磁数据与文献[12]报道一致，鉴定其为羽扇豆醇（lupeol）。
化合物9 无色油状;ESI-MS m/z 159[M-H]-。 1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ： 3.33（1H，s），3.50（1H，m，H-4），3.71（2H，m，H-8）。13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ： 70.8（C-1），36.0（C-2），31.3（C-3），70.7（C-4），31.3（C-5），36.0（C-6），45.4（C-7），59.2（C-8）。核磁数据与文献[13]报道一致，鉴定其为连翘环己醇（rengyol）。
化合物10 白色结晶;ESI-MS m/z 413[M-H]-。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ： 0.68（3H，d，J=7.2 Hz，H-18），0.81（3H，s，H-27），0.83（3H，s，H-29），0.85（3H，d，J=7.5 Hz，H-26），0.97（3H，d，J=6.7 Hz，H-21），1.01（3H，s，H-19），2.32（2H，t，J=7.5 Hz，H-2），3.51（1H，m，H-3）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz） δ： 37.4（C-1），28.4（C-2），71.9（C-3），39.8（C-4），138.5（C-5），121.9（C-6），32.1（C-7），28.4（C-8），50.3（C-9），36.6（C-10），21.2（C-11），37.4（C-12），42.5（C-13），56.2（C-14），24.5（C-15），29.3（C-16），56.9（C-17），12.0（C-18），19.5（C-19），36.6（C-20），19.2（C-21），34.1（C-22），26.2（C-23），45.9（C-24），32.0（C-25），21.2（C-26），19.9（C-27），23.2（C-28），12.4（C-29）。核磁数据与文献[14]报道一致，鉴定其为β-谷甾醇（β-sitosterol）。
化合物11 无色针状结晶。1H-NMR（CDCl3，400 MHz）δ： 0.68（3H，s，H-18），1.01（3H，s，H-19），0.93（3H，d，H-21），0.80（3H，d，H-27），0.82（3H，t，H-29），0.84（3H，d，H-26），5.35（1H，d，H-6），5.14（1H，dd，J=15.2，8.7 Hz，H-22），5.02（1H，dd，J=15.1，8.7 Hz，H-23），3.53（1H，m，H-3）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ： 37.4（C-1），29.2（C-2），71.9（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.8（C-6），31.7（C-7），32.0（C-8），50.2（C-9），36.6（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.4（C-13），56.9（C-14），24.43（C-15），29.24（C-16），56.9（C-17），12.1（C-18），19.1（C-19），39.9（C-20），19.1（C-21），138.4（C-22），129.4（C-23），51.4（C-24），32.0 （C-25），21.2（C-26），21.2（C-27），21.3（C-28），12.4（C-29）。核磁数据与文献[15]报道一致，鉴定其为豆甾醇（stigmasterol）。
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[责任编辑 丁广治]