摘要 目的：通过观察针刺对脑出血模型大鼠血肿形成后不同时间的血肿周围脑组织凋亡细胞及其百分率影响，研究针刺作用及其时效性的相关保护机制。方法：采用Wistar大鼠尾状核自体血缓慢注入法制作脑出血模型。脑组织细胞凋亡率测定分别应用TUNEL法及流式细胞术。结果：脑出血急性期TUNEL阳性细胞率显著升高，针刺各组均偏低，但高于假手术组，且针刺干预越早该比率越低；流式细胞检测结果基本与其一致。结论：针刺治疗能够改善脑出血急性期所造成的血肿周围脑组织相关的凋亡情况，从而在脑出血急性期起到保护脑组织的作用，且脑出血发生后针刺干预越早疗效越好。
关键词 针刺；脑出血急性期；实验性脑血肿；细胞凋亡；TUNEL法；流式细胞术；脑保护机制；时效关系
Abstract Objective：To study the protection mechanisms of function and time-effect relationship of acupuncture method by observing apoptotic cell in cerebral hemorrhage model rats′ brain tissue around hematomas and its percentage effects at different times in acute cerebral hemorrhage.Methods：The Wistar rats model of ICH were established by infusing autologous blood into caudate nucleus through stereotaxis technique.Apoptosis rate of brain tissue was analyzed by Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling （TUNEL） and flow cytometry （FCM） methods.Results：TUNEL positive cell percentage had a significant rise at acute stage of ICH，yet the rates tended to reduce in all the groups，which was higher than that in sham-operated group，and higher acupuncture intervention with lower percentage.The result of FCM was basically consistent with it.Conclusion：Acupuncture treatment is able to ameliorate the apoptosis of brain perihematoma tissues of rats with ICH so as to protect the brain tissue from acute stage of ICH.And the earlier acupuncture intervention，the better curative effect will achieve.
Key Words Acupuncture； Acute stage of cerebral hemorrhage； Experimental cerebral hemorrhage； Apoptosis cells； TUNEL； FCM； Cerebral protection mechanisms； Time-effect relationship
中圖分类号：R245文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.02.044
脑出血，是指原发性非外伤性脑实质内出血，是急性脑血管疾病中的危重类型，也是严重危害人类健康的4大疾病之一，并有较高的发病率、死亡率、致残率与较多的并发症，且很多研究已经证实：它和高血压病、高脂血症、代谢综合征等疾病有着密不可分的关联。关于脑出血的病理生理机制较为复杂，尚未彻底阐明。目前比较公认的几个重要病理环节例如血肿周围脑组织内Ca+超载、兴奋性氨基酸与抑制性氨基酸失稳态以及神经兴奋性毒性作用的发生等。有研究已表明，凋亡机制参与了脑出血后继发性神经元损伤的过程，且于凋亡机制中，以上提到的相关关键病理环节发挥了主导性的作用。
细胞凋亡，自从1972年被发现[1]以来，一直是细胞死亡研究领域的焦点话题。它是指为维持内环境稳定，由基因调控的细胞自杀过程。传统意义上，细胞死亡包括细胞坏死与细胞凋亡，而二者大不相同，前者是无序变化的被动过程，且坏死细胞会发出危险信号，并引发炎性反应，对邻近组织造成严重损害[2]；后者是有序变化的主动过程，涉及一系列基因的活化、表达及调控等的作用，但凋亡本身不属于病理状态下的自体损伤，而是为能更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程[3]，其生理影响及临床意义具有重要的研究价值[4]。凋亡细胞有其独特形态和生化特征：细胞核染色质固缩，DNA广泛降解断裂；细胞全面皱缩，细胞膜皱缩外突、包裹线粒体等细胞器、核片段形成凋亡小体[5]。细胞凋亡过程的详细机制尚不完全明了，但总体上可以分为起始和效应2个阶段。细胞凋亡的起始阶段是细胞在感受到相应的信号刺激后胞内一系列开关的开启或关闭；而凋亡一旦进入效应阶段则不可逆转，最终导致细胞死亡。细胞凋亡与许多学科都有着密切的联系，包括发育生物学、免疫学与临床医学等。从临床医学角度而言，许多疑难病症[6-14]的发病机制如血液病、艾滋病、肿瘤、自身免疫性疾病、胶原病、脑血管障碍、心血管疾病、肝脏疾病、皮肤病等均可通过细胞凋亡机制被揭示[15]。