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[摘 要] 目的：建立顶空气相色谱法测定吲哚酮类衍生物DHGA中乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷等4种残留溶剂的分析方法。方法：采用石英毛细管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85µm），FID检测器；进样口温度为140℃，检测器温度为250℃；程序升温：初始温度为35℃，保持10min，然后以10℃·min-1的速率升至200℃，保持7min。以二甲基亚砜（DMSO）为溶剂，载气为氮气。结果：乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷的线性范围分别为24.96～99.86µg·mL-1（r=0.9995）、15.04～60.15µg·mL-1（r=0.9996）、3.64～14.55µg·mL-1（r=0.9995）、3.05～12.19µg·mL-1（r=0.9996）。乙醇平均回收率为100.7%（RSD=2.78%）、甲醇平均回收率为101.3%（RSD=1.57%）、四氢呋喃平均回收率为99.96%（RSD=1.36%）、二氯甲烷平均回收率为99.05%（RSD=2.09%）。结论：该方法能够准确、快速测定这4种残留溶剂，适用于DHGA中残留溶剂测定。
[关键词] 顶空气相色谱法；吲哚酮类衍生物；残留溶剂
中图分类号： O657 文献标识码：A 文章编号：2095-5200（2016）01-085-03
目前，肿瘤死亡率居所有疾病第二位，仅次于心脑血管疾病[1]。肿瘤发生和发展与细胞调控激酶活性异常有着密切关系，抑制其活性可以起到抗肿瘤效果[2]。DHGA作为吲哚酮类衍生物，可以通过抑制这些激酶表达，表现出一定抗肿瘤活性[3]。
吲哚酮类衍生物DHGA在合成过程中使用了乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷等有机溶剂，为保证用药安全、有效，需进行残留量检测。
1 仪器与试剂
Aglient（GC-6820）气相色谱仪，安捷伦Cerity QA-QC色谱工作站（美国Agilent 公司），FID检测器；Sartorius（BP211D）电子天平。乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷均为分析纯；二甲基亚砜（DMSO）经过蒸馏纯化制得，DHGA原料药（批号：20131202、2031203、20131204，由军事医学科学院放射与辐射医学研究所提供）；氮气，（纯度>99.99）。
2 试验方法与结果
2.1 溶液配制
对照品储备液：精密称取乙醇0.2496g、甲醇0.1504g、二氯甲烷0.0305g、四氢呋喃0.0364g等4种有机溶剂，于100mL量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀。
对照品溶液：精密量取对照品储备液1mL于50mL量瓶中，用DMSO稀释至刻度，摇匀。
样品溶液：精密称量DHGA3批样品（批号：20131202、20131203、20131204）各0.1g，于10mL量瓶中，加DMSO溶解并稀释至刻度，摇匀。
空白溶液：精密移取2mLDMSO于顶空进样瓶中。
2.2 色谱条件
Agilent 6820气相色谱仪，HP7694顶空进样器，FID检测器；色谱柱：石英毛细管DB-WAX柱（30m×0.45mm×0.85µm）；载气：氮气（纯度>99.9%），柱流速：3.6mL·min-1；柱温为程序升温，初始温度为35℃，维持10min，然后以10℃﹒min-1速率升至200℃，维持7min；空气流速：340 mL·min-1，氢气流速：45mL·min-1，辅助气流速：20mL·min-1；顶空瓶平衡温度：90℃，传送带温度：105℃，定量环温度：110℃，顶空瓶加热时间：30min；检测器温度：250℃，柱头压：5psi，分流比为10：1。在此色谱条件下，这4种残留溶剂理论塔板数大于5000，分离度大于1.5。对照品溶液气相色谱图及空白DMSO色谱图分别如图1及图2所示。
2.3 精密度
精密移取对照品溶液2mL，置20mL顶空瓶中，平行6次，按“2.2”项下气相色谱条测定，计算乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷RSD分别为1.55%、1.97%、1.89%、1.67%，RSD均小于2%，说明精密度良好。
2.4 线性关系
从对照品储备液中精密量取20µL、32µL、40µL、48µL、60µL、80µL分别置顶空瓶中，加DMSO至2mL，密封，按“2.2”项下气相色谱条件测定。以被测残留溶剂浓度x（µg·mL-1）为横坐标，峰面积Y为纵坐标，所得线性回归方程见表1。表明乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷在相应线性范围内线性关系良好（r>0.999）。
2.5 检测限与定量限
取乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷适量，以DMSO逐步稀释，进行测定，按基线噪音信号3倍和10倍计算检测限与定量限。结果乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷检测限分别为39.50ng·mL-1、39.58ng·mL-1、44.35ng·mL-1、132.50ng·mL-1，定量限分别为98.75ng·mL-1、138.50ng·mL-1、88.70ng·mL-1、530.00ng·mL-1。
2.6 重复性
取一批DHGA样品（批号为20131202），按“2.1”项下方法配制样品溶液6份，进行测定。结果乙醇、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷均未检出。
2.7 加样回收率试验
取DHGA（批号20131202）样品约0.1g，精密称定，置10mL量瓶中（共10份），1份作为空白，另外9份加入一定量对照品储备液，配成80%（3份）、100%（3份）、120%（3份）对照品溶液。取2mL置顶空瓶中，按“2.2”项下气相色谱条件测定，计算回收率，结果见表2。乙醇、甲醇、四氢呋喃和二氯甲烷平均回收率（n=9）分别为100.7%、101.3%、99.96%、99.05%。
2.8 样品测定
按“2.2”项下色谱条件，检测了3批DHGA样品中有机溶剂残留量。结果表明：3批DHGA样品中均未检测出乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷，符合规定。
3 讨论
3.1 溶剂选择
由于DHGA不溶于水，微溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF），所以不宜选择常用水以及DMF作为溶剂。溶剂选择熔点高、溶解性能好，常用DMSO作为溶剂[4]。
3.2 进样方式选择
溶液直接进样和顶空进样都是常用测定残留溶剂方法[5-6]，溶液直接进样法，不仅对色谱柱有污染而且样品基线会漂移，产生鼓包，顶空进样可以避免污染色谱柱，所以最终选择顶空进样。
3.3 结语
本试验所建立方法能够准确、灵敏测定DHGA中乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷等有机溶剂残留，可以作为DHGA有机残留测定方法。
本文对3批DHGA原料药样品进行检测，发现这3批样品中均未含有乙醇、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷等残留溶剂，说明在合成过程中能够很好除去其中残留溶剂，合成工艺良好。
参 考 文 献
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[3] MOHAMMADI M， MCMAHON G， SUN L. Structures of the tyrosine kinase domain of fibroblast growth factor receptor in complex with inhibitors [J]. Science， 1997， 276（9）： 955-960.
[4] 中华人民共和国国家药典委员会.中国药典（二部）[S].北京： 中国医药科技出版， 2010： 61-65.
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