[摘要] 目的 探究腎癌组织组蛋白去乙酰化酶1、p73及血清IL-17表达的临床意义。 方法 方便选取于2015年1月—2016年12月该院收治的肾癌患者80例作为肾癌组，同期入院接受血液检查的健康人20名作为健康对照组。取肾癌患者瘤体边缘无坏死的肿瘤组织作为病理标本，取瘤旁正常组织作为正常标本，运用免疫组织化学法（S-P法）将标本进行染色，统计HDAC-1及p73阳性细胞，计算阳性率；抽取肾癌患者及健康对照组静脉血，ELISA法对两组血液进行IL-17含量检测。 结果 肾癌患者的肾癌组织中HDAC-1及p73的阳性率高达81.25%和77.50%，显著高于正常肾旁组织（P<0.001）；且随着临床分型的提高，HDAC-1及p73的阳性率随之提高（P<0.05）；Ⅲ期和Ⅳ期肾癌患者的HDAC-1及p73的阳性率高达100.00%；Ⅰ期和Ⅱ期肾癌患者HDAC-1及p73的阳性率分别为69.56%，86.11%和56.63%，77.78%；肾癌患者血清IL-17含量随着临床分型的升高而升高，Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肾癌患者血清IL-17含量分别高达（173.27±39.74）、（186.88±42.55）pg/mL和（189.45±15.84）pg/mL，与Ⅰ期患者相比含量显著增加（P<0.05）。结论 肾癌组织HDAC-1和p73的表达显著高于肾旁正常组织，且随着临床分型的增高而增加；肾癌患者外周血中IL-17的表达显著高于健康对照组，且随着临床分型的增高而增加。提示HDAC-1、p73及IL-17可能是促进肾癌发生发展的重要因子。
[关键词] HDAC-1；p73；IL-7；肾癌
[中图分类号] R737 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）08（c）-0005-04
Clinical Significance of Renal Cell Carcinoma Histone Deacetylases 1， p73 and Serum IL-17 Expression
NA Ri-su
Department of Urinary Surgery， First Affiliated Hospital of Baotou Medical College， Baotou， Inner Mongolia， 014010 China
[Abstract] Objective To study the clinical significance of renal cell carcinoma histone deacetylases 1、p73 and serum IL-17 expression. Methods 80 cases of patients with renal carcinoma admitted and treated in our hospital from January 2015 to December 2016 were selected as the renal carcinoma group， 20 cases of healthy patients with blood examination at the same period were selected as the healthy control group， and the tumor tissues whose tumor margin had no necrosis were selected as the pathological specimens， and normal tissues were selected as the normal specimens， and the specimens were dyed by the ？？immunohistochemical method？， and the HDAC-1 and p73 positive cells were counted and the positive rate was calculated and the venous blood was extracted from the renal cancer patients and healthy control patients， and the IL-17 content of the two groups was tested by the ELISA method. Results The positive rates of HDAC-1 and p73 in the renal cancer tissues in renal cancer patients were respectively 81.25% and 77.50%， which were obviously higher than those of normal tissues（P<0.01）， with the increase of clinical typing， the positive rates of HDAC-1 and p73 increases（P<0.05）， and the positive rate of HDAC-1 and p73 of renal cancer patients during the Ⅲ period and Ⅳ period were as high as 100.00%， and the positive rates of HDAC-1 and p73 of renal cancer patients during the Ⅰ period and Ⅱ period were respectively 69.56%，86.11% and 56.63%，77.78%， with the increase of clinical typing， the serum IL-17 content also increase， the serum IL-17 contents of renal cancer patients during the Ⅱ period， Ⅲ period and Ⅳ period were respectively （173.27±39.74）、（186.88±42.55）pg/mL and（189.45±15.84）pg/mL， and the content obviously increased compared with that of patients during the Ⅰ period（P<0.05）. Conclusion The expression of renal cancer tissues HDAC-1 and p73 was obviously higher than that of normal tissues， with the increase of clinical typing， the expression also increases， which reminds that the HDAC-1， p73 and IL-17 may be the important factors of promoting the occurrence and development of renal cancer.
[Key words] HDAC-1；p73；IL-7；Renal cancer
肾癌是起源于肾实质泌尿小管上皮系统的恶性肿瘤，又称肾细胞癌或肾腺癌，是泌尿系统常见的恶性肿瘤[1]。肾癌的发病率占恶性肿瘤发病率的2%～3%，占成人肾脏恶性肿瘤的80%～90%，且我国肾癌的发病率仍在逐年上升，严重威胁这人类的生命健康[2-3]。与其他恶性肿瘤的治疗不同，肾癌患者对放疗和化疗的灵敏度不高，有效率仅在10%左右[4]，因此积极挖掘其他的肾癌发病时肾癌组织的特点，有利于寻找更加有效的治疗方式。其中组蛋白去乙酰化酶-1（HDAC-1）在多种肿瘤组织中发现显著升高[5-7]；p73作为肿瘤相关蛋白，也被证实与肿瘤的疾病进程密切相关[8]；血清白介素-17（IL-17）能够起到免疫增强的作用，而免疫治疗是肾癌治疗中存在一定效果的治疗手段[9]。因此，该研究方便选取于2015年1月—2016年12月该院收治的肾癌患者80例作为肾癌组，同期入院接受血液检查的健康人20名作为健康对照组，探究肾癌组织组蛋白去乙酰化酶1、p73及血清IL-17表达的临床意义，现报道如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
方便选取该院收治的肾癌患者80例，均经过病理检查、临床症状、静脉尿路造影（IVU）及CT检查确诊。其中男44例，女36例，年龄39～79岁，平均（61.52±10.55）岁；透明细胞癌55例，颗粒细胞癌16例，混合细胞癌5例，未分化细胞癌4例；TNM分期：Ⅰ期23例，Ⅱ期36例，Ⅲ期19例，Ⅳ期2例；病理分级：Ⅰ级36例，Ⅱ级30例，Ⅲ期14例；其中Ⅰ级代表分化良好，Ⅱ级代表分化中等，Ⅲ期代表分化不良。并选取同期入院接受血液检查的健康患者20名，作为对照组，其年龄、性别及其他临床资料与肾癌患者近似。在经该院伦理委员会同意的情况下，患者均签署知情同意书。
1.2 纳入与排除标准
纳入标准：①符合世界卫生组织肾癌组织学分型的诊断标准；②纳入研究对象前未经过放化疗治疗的患者；③预计生存期大于3个月；排除标准：①合并其他恶性肿瘤的患者；②肿瘤发生转移的患者；③合并其他自身免疫性疾病；④精神疾病患者。
1.3 研究方法
①肾癌组织HDAC-1及p73含量测定：进行手术时，确定目标瘤体的位置，取瘤体边缘无坏死的肿瘤组织作为病理标本，取瘤旁正常组织作为正常标本。将采取到的标本进行石蜡切片，厚度保持在3 μm左右，按照免疫组织化学法（S-P法）将标本进行染色，具体方法如下：切片进行脱蜡、水化处理，并用过氧化氢溶液进行阻断。阻断后进行一抗孵育，其中HDAC-1抗体、p73抗体均选用鼠抗人的单克隆抗体，均购自上海生工生物公司。然后进行苏木精染色，染色后进行DAB（DAB试剂盒购自上海研晶生物科技有限公司）显色，中性树脂封片，应用显微镜对标本进行拍照。以上所有操作均严格按照说明书进行。阳性细胞判定方法：HDAC-1阳性以细胞浆中出现黄褐色、棕黄色或浅黄色颗粒的细胞为阳性，p73以细胞浆中出现棕黄色颗粒的细胞为阳性。在每张片子上选取5个高倍视野（400×），每个高倍视野计数1 000个细胞来确定每个视野的阳性率，并计算平均阳性率。阴性（-）：无染色细胞或者染色细胞数量<25%；阳性（+）：染色细胞数量在25%～75%之间；强阳性（++）：染色细胞数量>75%。②肾癌患者于入院后空腹抽取静脉血，健康对照组抽取静脉血，分离得到血清后，运用酶联免疫吸附法（ELISA法）对两组血液进行IL-17含量检测，ELISA试剂盒购自达科为生物技术有限公司，所有操作严格按照说明书执行。
1.4 观察指标
①统计肾癌患者病理标本与正常标本HDAC-1及p73表达阳性率；②统计肾癌患者与健康对照组血清中IL-17含量。
1.5 统计方法
采用SPSS 17.0统计学软件对该研究所有数据进行处理和研究，计量资料采用（x±s）的形式，运用t检验；计数资料采用[n（%）]的形式，运用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 肾癌组织与肾旁组织中HDAC-1与p73表达情况比较
肾癌患者的肾癌组织中HDAC-1阳性率高达81.25%，p73阳性率高达77.50%，显著高于肾旁正常组织的HDAC-1及p73阳性率，两组间差异有统计学意义（P<0.001），如表1所示。
2.2 不同临床分型的肾癌患者肾脏组织HDAC-1与p73表达情况比较
随着临床分型的提高，HDAC-1及p73的陽性率随之提高，Ⅲ期和Ⅳ期肾癌患者的HDAC-1及p73的阳性率高达100.00%；Ⅰ期和Ⅱ期肾癌患者HDAC-1及p73的阳性率分别为69.56%，86.11%和56.63%，77.78%；HDAC-1及p73的阳性率的组间差异有统计学意义（P<0.05）；12例HDAC-1阴性患者仅在Ⅰ期和Ⅱ期其存在，分别为7例和5例；18例p73阴性患者也仅在Ⅰ期和Ⅱ期其存在，分别为10例和8例。如表2所示。
2.3 不同临床分型的肾癌患者级健康对照组患者血清IL-17含量比较
健康对照组相比，肾癌患者不同临床分型患者的血清IL-17含量显著升高（P<0.05），且随着临床分型的升高而升高，与Ⅰ期患者相比，Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肾癌患者血清IL-17含量显著增加（P<0.05）。如表3所示。
3 讨论
肾癌患者肾癌组织及血清中一些物质的表达显著增加，该研究主要探究肾癌组织组蛋白去乙酰化酶1（HDAC-1）、p73及血清白介素-17（IL-17）的表达与肾癌发病状况之间的关系。HDAC是一种类蛋白酶，能够起到修饰染色体、调节基因表达和调控组蛋白乙酰化速率的作用，正常的HDAC能够使组蛋白的乙酰化与去乙酰化保持一种稳态[10]。近年来，有研究发现，HDAC-1在多种肿瘤组织中高表达，并且发现HDAC-1参与了细胞周期的整个过程，通过控制线粒体的转位，增加肿瘤细胞的表达和浸润，促进肿瘤细胞向远处转移[11-12]。而抑制HDAC-1的表达，能够启动凋亡程序，显著抑制肿瘤细胞的增殖，因此抑制HDAC-1的表达被认为是治疗癌症的新机制[13]。p73基因是定位于1p36上的1个新基因，属p53超家族成员，与p53的功能相似，p73的过表达在多种肿瘤组织中发现，正常组织中p73的表达很少，p73的表达与肿瘤细胞的增殖迁移、患者预后等存在密切联系，徐松涛等[14]的研究发现膀胱癌组织中p73的阳性率达到41%，正常的膀胱粘膜组织中午表达；东星等[15]的研究发现p73在乳腺癌中的表达率高达80.00%，显著高于乳腺癌旁组织。
该研究发现，肾癌患者的肾癌组织中HDAC-1阳性率高达81.25%，p73阳性率高达77.50%，显著高于肾旁正常组织的HDAC-1及p73阳性率，两组间差异有统计学意义（P<0.001）。且随着临床分型的提高，HDAC-1及p73的阳性率随之提高，Ⅲ期和Ⅳ期肾癌患者的HDAC-1及p73的阳性率高达100.00%；Ⅰ期和Ⅱ期肾癌患者HDAC-1及p73的阳性率分别为69.56%，86.11%和56.63%，77.78%；HDAC-1及p73的阳性率的组间差异有统计学意义（P<0.05）；12例HDAC-1阴性患者仅在Ⅰ期和Ⅱ期其存在，分别为7例和5例；18例p73阴性患者也仅在Ⅰ期和Ⅱ期其存在，分别为10例和8例。与以上研究的结果相类似。
IL-17在恶性肿瘤发生中的作用在近几年逐渐受到研究者的关注，IL-17与受体的结合能够促进多种促炎细胞因子的分泌，加剧肿瘤患者的炎症。在多种恶性肿瘤的肿瘤组织及外周血中检测到IL-17的高表达，表明IL-17可能促进了恶性肿瘤的增殖浸润等过程，其中于晓辉等[16]的研究指出肝性肝细胞肝癌患者外周血中的IL-17含量高达（84.38±6.01）ng/mL，显著高于健康对照组血清中IL-17的含量；周素素，林佳如等[17-18]的研究在胃癌和肾病中也发现了相似的结论。有报道称IL-17也可以直接作用与肿瘤细胞，促进VEGF的产生，而VEGF产生的增多能够促进血管内皮细胞的增殖，并增加血管的通透性，在根本上促进了肿瘤细胞的增殖浸润[19]。该研究结果显示，与健康对照组相比，肾癌患者不同临床分型患者的血清IL-17含量显著升高（P<0.05），且随着临床分型的升高而升高，与Ⅰ期患者相比，Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期肾癌患者血清IL-17含量显著增加（P<0.05）。该研究结果与上述实验结果相类似。
综上所述，肾癌组织HDAC-1和p73的表达显著高于肾旁正常组织，且随着临床分型的增高而增加；肾癌患者外周血中IL-17的表達显著高于健康对照组，且随着临床分型的增高而增加。提示HDAC-1、p73及IL-17可能是促进肾癌发生发展的重要因子。
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（收稿日期：2017-05-23）