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摘要：目的 研究多重荧光聚合酶链式反应（PCR）技术对小儿咽拭子呼吸道病毒、病原菌检测的应用价值。方法 筛选2018年1月～12月到乌鲁木齐市社区服务门诊就诊的社区获得性肺炎（CAP）患儿524例，采用多重PCR技术检测患儿咽拭子病原菌，分析CAP病原菌的分布情况及其与年龄、季节等的关系。结果 CAP病原检测结果大部分属于病毒性，以乙型流感病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体等为主，细菌类以肺炎克雷伯菌等为主;与患儿年龄、季节有关，3岁以下患儿仍是CAP的主要发病年龄段，尤其是婴幼儿最多，发病多集中在秋季和冬季;2种以上病原混合感染形式严峻。结论 多重PCR技术对小儿咽拭子病原菌检测的应用效果良好，快捷方便。
关键词：多重PCR技术;小儿咽拭子;呼吸道病毒;病原菌
中图分类号：R373.1 文献标识码：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.15.039
文章编号：1006-1959（2019）15-0119-04
Abstract：Objective To study the application value of multiplex fluorescent polymerase chain reaction （PCR） in the detection of respiratory viruses and pathogens in children with throat swabs.Methods A total of 524 children with community-acquired pneumonia （CAP） who were treated in the community service clinic in Urumqi from January to December 2018 were eolled. The phage swab pathogens were detected by multiplex PCR and the distribution of CAP pathogens was analyzed. Relationship between age， season， etc.Results Most of the results of CAP pathogen detection were viral， mainly influenza B virus， Chlamydia pneumoniae， Mycoplasma pneumoniae， and bacteria such as Klebsiella pneumoniae; related to age and season of children， under 3 years old children are still the main age of onset of CAP， especially in infants and young children. The incidence is mostly concentrated in autumn and winter; the mixed forms of more than two pathogens are severe.Conclusion The multiplex PCR technique has a good effect on the detection of pathogenic bacteria in children"s throat swabs， which is quick and convenient.
Key words：Multiplex PCR technology;Pediatric throat swab;Respiratory virus;Pathogen
社區获得性肺炎（community acquired pneumonia，CAP）属于呼吸系统疾病，在小儿科极为常见，是导致儿童死亡的重要疾病之一。据报道，在一些发达国家，<5岁的儿童肺炎发病率约为4.00%[1]。我国每年有2000万左右的儿童罹患肺炎，大约30万5岁以下儿童死亡，是导致国内婴幼儿死亡的首位疾病[2]。由于CAP的病因复杂，对患儿的病原确认存在一定困难，而在无法明确病原的情况下，医务工作者常根据临床经验治疗，易导致不合理用药，造成严重影响。近年来对呼吸道疾病，多重荧光聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术在小儿咽拭子病原菌检测方面，具有简便、快捷、灵敏度高、儿童接受度好等优点[3]。本文主要研究多重PCR技术在小儿咽拭子呼吸道病毒、病原菌检测中的应用价值，报道如下。
1资料与方法
1.1一般资料 筛选2018年1～12月到乌鲁木齐市社区门诊就诊的CAP患儿。纳入标准：①年龄28 d～12岁，性别不限;②依据最新版《儿童社区获得性肺炎管理指南》确诊为CAP。排除标准：①患有其他基础性疾病;②肺结核病;③先天性免疫缺陷。最终符合入选标准的患儿共524例，其中男273例，女251例。将所有研究对象按年龄分为：≤1岁组176例、1～3岁组129例、3～5岁组117例、>5岁组102例。将所有研究对象按季节分组：春季组104例、夏季组75例、秋季组176例、冬季组169例。
1.2方法 咽拭子标本采集：专业工作者一只手用压舌板压住舌根，另一只手用消毒棉签轻快地拭擦咽、扁桃体以及两侧腭弓，把棉签置入病毒采样液试管内（插入前快速消毒试管口），及时送至乌鲁木齐市疾病预防控制中心病毒实验室采用多重PCR技术检测。
1.3观察指标 采用多重PCR技术检测CAP的各种病原，包括细菌性病原、病毒性病原以及其他非典型病原。检测出感染病原即为阳性。
1.4统计学处理 使用SPSS 21.0对本研究数据作统计分析。计量资料用（x±s）表示，使用t检验;计数资料用（%）表示，使用？字2检验。P<0.05表示差异具有统计学意义。
2结果
2.1病原学构成 在524例CAP患儿中，共有502例病原检测呈阳性，检出率95.80%。其中细菌类51例，2种以上细菌混合感染共6例;病毒类414例阳性，2种以上病毒混合感染148例;细菌性和病毒性混合感染16例。混合感染205例。病原结果分布及在524例患儿中占比见表1。
2.2年龄与病原的关系
2.2.1年龄与病毒性病原的关系 每个年龄组均是乙型流感病毒、肺炎支原体、肺炎衣原体、腺病毒最多。肺炎支原体分布以>5岁儿童为主，与1～3岁儿童比较，差异具有统计学意义（P<0.05）;呼吸道合胞病毒分布以≤1岁儿童为主，与>5岁儿童比较，差异具有统计学意义（P<0.05）;乙型流感病毒分布以大年龄儿童为主，其他三个年龄段的发病率均高于≤1岁儿童，差异具有统计学意义（P<0.05）;2种以上病毒的混合感染≤1岁儿童的发病率均低于1～3岁儿童、>5岁儿童，差异具有统计学意义（P<0.05），年龄越大的儿童有2种以上病原的混合感染可能性越大，见表2。
2.2.2年龄与细菌性病原的关系 ≤1岁儿童：肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌较多;1～3岁儿童：铜绿假单胞菌较多;3～5岁儿童：细菌性感染较少;>5岁儿童：肺炎克雷伯菌较多。金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、肺炎链球菌在不同年龄段的发病率以年龄较小的儿童为主，尤其是≤1岁儿童，差异有统计学意义（P<0.05），见表3。
2.3季节与病原的关系
2.3.1季节与病毒性病原的关系 春夏季较秋冬季肺炎支原体的感染更容易，差异有统计学意义（P<0.05）;相对于春季，乙型流感病毒分布以秋冬季为主，差异有统计学意义（P<0.05）;发生2种以上病毒的混合感染冬季相对于春夏秋季的可能性较小，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。
2.3.2季节与细菌性病原的关系 在冬季较易感染肺炎链球菌，铜绿假单胞菌好发于春季，见表5。
3讨论
本研究显示，乌鲁木齐市社区服务门诊获得性肺炎病原检测结果大部分属于病毒性，以乙型流感病毒、肺炎衣原体、肺炎支原体等为主，细菌类以肺炎克雷伯菌等为主;与患儿年龄、季节有关，3岁以下患儿仍是CAP的主要发病年龄段，尤其是婴幼儿最多，而肺炎支原体、乙型流感病毒分布以5岁以上儿童为主，细菌性感染以年龄较小的儿童为主，年龄越大的儿童有2种以上病原的混合感染可能性越大，发病多集中在秋季和冬季;2种以上病原混合感染形式严峻。研究显示，呼吸道感染与气象环境变化相关，并存在一定的滞后性，低温、大风、干燥易导致呼吸道感染[4]。杨湛[5]的研究发现，除肺炎衣原体外的其它呼吸道病原体的感染率有季节差异，乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎支原体以及嗜肺军团菌Ⅰ型好发于冬季，副流感病毒、腺病毒、Q热立克次体及甲型流感病毒感染常见于秋冬季。分析显示，由于季节气候的影响，乙型流感病毒感染期间甲型流感病毒、腺病毒感染几率也会增加;肺炎支原体感染期间腺病毒、呼吸道合胞病毒、甲型流感病毒、嗜肺军团菌感染几率也会增加;细菌性病原感染与温度有关，肺炎链球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与温度呈统计学负相关，每下降0.021℃，可能增加1例大肠埃希菌或者肺炎链球菌感染患者;每下降0.035℃，金黄色葡萄球菌感染几率增加[6-8]。
由于儿童CAP病原学复杂，尤其是2种以上病原的混合感染容易引起漏诊，对临床的诊疗造成困扰，此种情况下医务人员常根据临床经验施与治疗，从而导致药物的不合理使用，增加其经济负担，造成资源浪费，给患儿及其家属带来身心上的伤害，甚至影响患儿的生长发育。有报道称，随着医学的发展，儿童抗生素数量和种类不断增多，同时儿童抗生素滥用的问题也日益严重，导致不良反应增加、细菌耐药性增强、药品资源浪费等各种严重问题，严重危害患儿健康带来[9]。
多重PCR技术检测咽拭子呼吸道病毒，过程主要分为呼吸道病毒酸提取及多重体系检测。其原理是：在多重PCR的基础上，结合媒介探针技术和多色荧光探针熔解曲线分析技术，建立单管的四色检测体系，分析不同的熔解曲线解链温度值，区分不同的呼吸道病毒以及病原菌，因此实现对单管多种病原菌的同时检测[10，11]。
本文通过多重PCR技术对小儿咽拭子呼吸道病毒、病原菌进行检测，研究儿童CAP病原菌与年龄、季节等的关系，以便作出准确的诊断、合理的治疗以及采取有效的、针对性的预防措施。对于CAP监测，为可能暴发疫情的预测及预警提供了有價值的资料，是预防控制感染的先进措施和关键策略。无论是单个病原感染或是多个合并感染，多重PCR检查技术都能够明确病原，对临床诊断具有极大意义。根据多重PCR检测结果，给迅速诊断提供准确的参考，给患儿做出针对性的治疗，使用相应抗菌性的药物或者抗病毒治疗或者综合治疗措施，合理使用药物，避免滥用抗生素，减少细菌耐药性以及副作用的影响，让患儿得到有利的治疗，从而提高治愈率，减少痛苦和伤害，有利于社会和谐。
综上所述，多重PCR技术对小儿咽拭子病原菌检测的应用效果良好，灵敏度高，快捷方便，小儿接受良好，检查结果具有较高的参考价值。
参考文献：
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[11]湛玉霞，罗光华.高通量聚合酶链式反应技术的研究进展[J].山东医药，2019，59（5）：100-104.
收稿日期：2019-3-15;修回日期：2019-3-25
编辑/张建婷