【摘要】 目的 研究血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与纤溶系统之间的关系。方法 选择冠心病、高血压患者126例和健康对照者66例，分别检测ACE基因及多态性，测定血浆中D-二聚体(dD)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)各值。结果 ①疾病组dD、Fg、APTT水平明显高于对照组(P<0.05)，而PT、TT水平明显低于对照组(P<0.05)。②基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，差异有统计学意义。③ ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702，P<0.01)；与PT、TT、APTT浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653，P<0.001)。结论 ACE基因DD型和D等位基因与纤溶系统有关，I等位基因则无关。
【关键词】 血管紧张素转换酶；基因；纤溶系统
The correlation of the angiotersin-converting enzyme gene polymorphism and fibrinolytic System
WANG Jing-ming. Weifang Peoples Hospital，The Affiliated of Weifang Medical College，Weifang261041，China
【Abstract】 Objective To study the relationship of the angiotersin-converting enzyme(ACE)gene polymorphism and fibrinolytic system.Methods ACE gene polymorphism and plasm d-dimer(dD),prothrombin time(PT), fibrinogen(Fg) levels and thrombin time(TT) and activation part thrombin time(APTT) were simultaneously measured in 126 patients with coronary heart diseases or hypertensive and 66 control subjects.The relation ACE gene polymorphism dD,PT,Fg,TT and APTT was explored.Results ① The dD,Fg level and APTT of the patients group were higher than that among the control group(P<0.05)，but the PT and TT level was lower(P<0.05).② The dD and Fg level of ACE gene DD genotype group were significant difference than those of ID and Ⅱ genotype group, but the PT,TT andAPTT level were lower(P<0.05).③ACE gene polymorphism were signicantly positive correlation with dD and Fg levels (r=0.671、0.702,P<0.01); negativecorrelation with PT and TT and APTT (r=-0.648、-0.683、-0.653，P<0.01). Conclusion DD genotype and D allele is closely related to Fibrinolytic System,but I allele is not.
【Key words】 Angiotersin-converting enzyme；Gene；Fibrinolytic system
近年来，凝血、纤溶系统与动脉粥样硬化及其引发事件的关系倍受关注，尤其在缺血性心脑血管疾病方面。研究发现血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与心脑血管发病高度相关［1~3］，但ACE基因多态性在凝血及纤溶中的作用以及其与纤溶的关系，查新尚未见的报道。因此，我们应用PCR技术和遗传学方法测定了疾病组和对照组的ACE基因多态性，测dD、PT、Fg、TT、APTT各值。旨在探讨ACE基因多态性与纤溶系统之间的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 疾病组:126例，男76例，女50例，选自2001年1月至2009年10月间住院患者，病例均符合WHO关于冠心病、高血压病的命名和诊断标准，年龄(62.76±8.5)岁﹙52~77岁﹚。其中单一疾病：冠心病22例，高血压20例；合并疾病：冠心病合并高血压者20例，高血压合并冠心病者24例。对照组：选择经病史、体检、实验室检查、X线及心电图检查，排除各类心脑血管疾病、糖尿病和肝肾功能不良者及无高血压病史者66例，男40例，女26例，年龄53~76岁，平均年龄(63.28±8.8)岁。均按ACE基因型分为Ⅱ、ID和DD基因型三组。
1.2 方法 受试者均禁食12 h以上，晨间取肘静脉血，用酶法测D-二聚体(dD)、凝血酶原时间(PT)、纤维蛋白原(Fg)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)，Fg采用Follin酚法。
ACE基因检测及多态性：取肘静脉血5 ml，肝素抗凝，酚-氯仿法抽提基因组DNA，应用PCR方法扩增DNA片段。参照Rigat设计引物［4］，上引物5-CTGGAG ACC ACT CCC ATC CTT TCT-3；下引物5-GAT GTG GCC ATC ACA TTC GTC AGA T-3。扩增程序：94℃变性1 min，58℃退火1 min，72℃延伸1 min，共30个循环。取PCR产物10 μl，采用2%凝胶电泳(含溴乙锭0.5 μl/ml),经100V 60 min,在紫外光下观察、镊影。可见ACE基因有190bp(D)和490bp(I)两个基因片段(附图)，三种基因型：DD、ID和Ⅱ型。
1.3 统计学方法 结果以均数±标准差(x±s)表示。用基因计数方法计算各组的基因型和等位基因频率；相关分析采用多元线性相关分析方法，计算偏相关系数(r)值，均数比较，各组比较采用F检验，两组比较采用q检验，计数资料作χ2检验。α= 0.05为水准。
附图
ACE多态性基因图
2 结果
2.1 正常对照组与疾病组ACE基因多态性频率见表1。疾病组ACE基因DD型频率38.1%和D等位基因频率54.4%明显高于正常人的19.7%和34.1%(χ2分别为6.63、8.94，P<0.05、P<0.05)。
2.2 临床资料及dD、PT、Fg、TT、APTT指标见表2。疾病组中，dD、Fg水平明显高于对照组(P<0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于对照组(P<0.05)。将疾病组和对照组按ACE基因型分组，分别进行比较。在三种基因型患者中，ACE基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，相比有显著性差异；ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702，P值均<0.01)；与PT、TT、APTT浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653，P<0.01)。
3 讨论
3.1 ACE基因多态性研究范围的扩大 近年来，编码ACE基因多态性被认为是冠心病、高血压病的侯选易感基因之一，与维持及修复心血管结构密切相关［4-6］。而我们研究发现ACE基因多态性与凝血及纤溶系统关系密切。与凝血和纤溶系统中的dD、PT、Fg、TT、APTT等指标密切相关，疾病组中dD、Fg水平明显高于对照组(P<0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于对照组(P<0.05)。将疾病组和对照组按ACE基因型分组，分别进行比较。在三种基因型患者中，ACE基因DD型疾病组dD、Fg水平明显高于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，而PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组(P<0.05)，相比有显著性差异；ACE基因多态性与dD、Fg浓度间显著正相关(r值分别为0.671、0.702，P<0.01)；与PT、TT、APTT浓度间存在显著负相关(r=-0.648、-0.683、-0.653，P<0.01)。相关分析发现，ACE基因DD型与dD、Fg浓度明显正相关，与PT、TT、APTT明显负相关。结果提示ACE基因尤其DD型可能是影响凝血及纤溶异常的关键，这进一步强调了基因DD型者检测和控制凝血及纤溶异常的重要性。
3.2 凝血与纤溶系统与心脑血管疾病的关系
众所周知，缺血性心脑血管的发病过程中存在着高凝状态，凝血和纤溶系统贯穿在心脑血管病发病的始终，心脑血管疾病已成为死亡与致残最重要的原因。因此，研究治疗和预防心脑血管疾病尤为重要。
多数研究认为［7,8］, dD、Fg水平升高，是冠心病的重要危险因素之一，本文观察发现基因DD型疾病组中，dD、Fg水平升高显著，明显高于其他基因型组(P<0.01)，而基因DD型对照组中，dD、Fg水平也升高，明显高于其他基因型组(P<0.05)。纤维蛋白原是血小板聚集的重要介质之一，是血浆中最大的链状蛋白，对血浆及全血粘度影响极大，促进动脉粥样硬化的发生发展，而Fg升高进一步加重缺血性心脑血管的原因之一。另外，血浆中dD过多，促进局部炎症细胞特别是单核细胞合成并释放某些细胞因子，导致凝血亢进，增加血栓形成的倾向，这也是缺血性心脑血管病中，dD、Fg升高的原因所在。PT、TT、APTT是反应凝血的重要指标。PT、TT、APTT缩短，除了少数因为凝血因子Ⅷ或Ⅻ的活性特别高存在高凝状外；还存在于缺血性心脑血管等疾病中，单独测PT临床上意义不大，与TT、APTT同时检测不但可扩大筛选因子活性范围，而且提高对肝素类物质检测的敏感性。在缺血性心脑血管疾病中，PT、TT、APTT各值缩短。本研究示，ACE基因DD型疾病组，PT、TT、APTT水平明显低于ID、Ⅱ型组，相比差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析发现，与PT、TT、APTT明显负相关。
研究表明，dD、PT、Fg、TT、APTT异常除与环境因素有关外，还与ACE基因等遗传因素有关。随着分子生物学研究的不断发展和范围的不断扩大，检测ACE基因多态性在凝血及纤溶中的作用，对心脑血管疾病的治疗和预防起了积极地作用，对抗栓和溶拴药物的应用起良好的指导作用。
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