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【摘要】 目的：观察不同频率电针刺激对大鼠痛情绪的作用。方法：本研究以不同频率电针刺激对痛情绪的作用为研究对象。给大鼠左侧后脚掌注射完全弗氏佐剂（CFA），诱导其产生炎性痛并与环境相匹配，建立条件性位置回避（conditioned place avoidance，CPA）模型，给予大鼠环跳穴（GB30）电针刺激（电流3 mA，波宽0.1 ms，刺激频率2、10、100 Hz），通过条件位置回避装置观察在电针刺激前后痛情绪行为变化。结果：2、10、100 Hz电针刺激均明显反转了大鼠的C-CPA反应，但各刺激频率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：不同频率的电针刺激均可缓解痛情绪，且无频率依赖性。
【关键词】 电针； 刺激频率； 条件位置逃避； 痛情绪
Behavioral Observation of Different Frequencies Electroacupuncture Stimulation to Relieve Pain Emotion in Rats/QIN Guo-hua，MA Yang，ZHAO Xin，et al.//Medical Innovation of China，2017，14（14）：001-004
【Abstract】 Objctive：To observe the relieve effect of different frequencies electroacupuncture stimulation to pain emotion in rats.Method：In this study，we exploreded the effects of electroacupuncture（EA） at various frequencies on the pain emotion.Complete Freund’s adjuvant （CFA） was subcutaneously injected into the left hind-paw to induce the inflammatory pain and match the environment to establish conditioned place avoidance （C-CPA） behavioral model，then Huantiao acupoints （GB30） in rats were treated by EA（current intensity 3 mA，width 0.1 ms，stimulus frequency 2，10，100 Hz），C-CPA behavioral responses were observed.Result：EA at 2，10，100 Hz stimulus frequency were all reversed the C-CPA behavioral responses，but there were no significant differences among them（P>0.05）.Conclusion：EA at various stimulation frequencies all can eviate the pain emotion of rats，and there is no frequency dependence.
【Key words】 Electroacupuncture； Stimulus frequency； Conditioned place avoidance； Pain emotion
First-author’s address：Physiology Department of the Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.14.001
世界卫生组织（WHO）和国际疼痛研究协会（IASP）定义疼痛是组织损伤或潜在组织损伤所引起的不愉快感觉和情感体验，包括痛感受和痛情绪两个成分[1]，已知前扣带皮层（anterior cingulate cortex，ACC）是内侧痛觉系统的重要组成部分，它接受丘脑内侧核群的纤维投射，主要参与痛觉情绪信息的编码[2]，也有实验证明，痛情绪引起的条件位置逃避（conditioned place avoidance，CPA）反應可通过切除大鼠双侧rACC得到缓解[3]，这都说明ACC在情感情绪调节过程中居于重要地位。
以往的研究表明电针可以镇痛，并且不同频率电针刺激对大鼠痛感觉的作用机制有一定差异，低频电针通过促进脊髓上中枢的内源性阿片肽释放，作用于相应的阿片受体；在脊髓内，低频电针（2 Hz）和高频电针（100 Hz）释放内啡肽和强啡肽，作用于δ受体和κ受体发挥其镇痛作用，低频电针在脑内释放脑啡肽，作用于μ受体发挥镇痛作用[4-11]。还有研究证实电针可以通过激活阿片受体缓解痛情绪反应[5]，10 Hz的电针刺激可通过激活μ阿片受体反转大鼠CFA诱导的CPA反应[6-7，12]，但低频电针（2 Hz）和高频电针（100 Hz）是否也可以和10 Hz的电针刺激一样有类似的缓解痛情绪的作用尚并不清楚。
因此本实验利用CPA行为模型，给予大鼠环跳穴（GB30）电针刺激（电流3 mA，波宽0.1 ms，刺激频率2、10、100 Hz），通过条件位置回避装置观察不同频率电针刺激对痛情绪的影响。
1 材料与方法
1.1 实验动物和分组 选取购于中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心（中国，北京，经营许可证编号：SCXK-（军）2012-0004）的健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重240～260 g，采用随机数字表法分为：生理盐水（NS）假电针组、完全弗氏佐剂（CFA）+假电针组、CFA+2 Hz电针组、CFA+10 Hz电针组、CFA+100 Hz电针组5组，每组6～8只。
1.2 仪器 脑立体定位仪（Narishige，日本）；NeuroMotive软件（Stoelting公司，美国）；ANY-Maze软件（Stoelting公司，美国）；
1.3 CPA反应观察 取术后5～7 d，体重增加的大鼠，在实验笼具中进行CPA反应测试[13-17]，第1天去掉中间挡板，测大鼠在活动装置中的基线10 min；第2天隔开活动装置的中间挡板，将大鼠放入一侧（非痛环境）适应30 min，然后在大鼠左侧脚掌皮下注射弗氏完全佐剂CFA（0.08 mL，40 μg）后在活动装置的另一侧（痛环境）条件性适应30 min；第3天测量方法同第1天，见图1。
1.4 电针刺激 电针穴位环跳穴靠近髋关节，位于股骨头大转子最凸点与骶管裂孔连线的外1/3与中1/3交点处。刺激频率为2、10、100 Hz，电流3 mA，波宽0.1 ms[6]。
1.5 统计学处理 采用Graph Pad Prism 6软件进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验；计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 条件位置回避模型的建立 大鼠左侧后脚掌分别注射0.9%氯化钠注射液（NS）和CFA， NS组条件匹配前后在痛环境停留时间基本保持不变，CFA组条件匹配后痛侧停留时间较匹配前缩短，对痛环境产生回避，前后比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1、图2。
2.2 不同频率电针刺激对痛情绪的作用 于大鼠左侧后脚掌注射CFA，同时环跳穴分别给予2、10、100 Hz的电针刺激，不同频率电针组条件匹配前后痛环境停留时间比较差异均无统计学意义（P>0.05），痛环境均未产生明显的回避反应，见表2、图3。
3 讨论
各种原因所致的慢性持续性疼痛给许多患者带来巨大的痛苦，因疼痛而生的恶性情绪带来的危害甚至大于疼痛本身。电针可以镇痛，并且不同频率电针刺激对大鼠痛感觉的作用机制有一定差异。前扣带皮层（anterior cingulate cortex，ACC）与痛情绪有关，ACC神经元对伤害性刺激能产生反应[18-19]，电生理研究表明痛情绪时ACC脑区神经元放电有明显变化[13，15]。切除慢性痛患者的ACC和周围皮层组织，能够明显缓解患者焦虑、抑郁等痛情绪反应，而对痛感觉没有影响[16，20-21]。电针对中枢神经系统（CNS）的影响不仅局限于内源性阿片系统，还可同时激活其他非肽类递质，如多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、缩胆囊素（CCK）、谷氨酸（Glu）等[22-24]。电针也可以缓解痛情绪，10 Hz电针刺激可以减弱完全弗氏佐剂（CFA）诱导产生条件性位置逃避（CPA）反应，激活ACC脑区μ-阿片受体缓解痛情绪[25]。
本研究使用CFA诱导产生条件性位置逃避（CPA）装置，分别2、10、100 Hz电针刺激，结果表明不同频率电针刺激匹配前后痛环境停留时间比较差异均无统计学意义（P>0.05），无明显的回避反应。这与之前所研究的10 Hz电针刺激缓解痛情绪结果相同。且2、10、100 Hz组之间的回避分数比较差异均无统计学意义（P>0.05），说明电针刺激缓解痛情绪无明显的频率依赖性。
参考文献
[1] Schnitzler A，Ploner M.Neurophysiology and functional neuroanatomy of pain perception[J].Jour Clin Neurophysiol，2000，17（6）：592-603.
[2]王锦琰，罗非，韩济生.前扣带回在痛感知中的作用[J].中国疼痛医学杂志，2004，10（2）：113-116.
[3] Ikeda H，Takasu S，Murase K.Contribution of anterior cingulate cortex and descending pain inhibitory system to analgesic effect of lemon odor in mice[J].Molecular Pain，2014，10（1）：14.
[4]王锦琰，罗非，韩济生.中枢神经元放电的在体多通道同步记录技术[J].生理科学进展， 2003，34（4）356-358.
[5] Martin D P，Sletten C D，Williams B A，et al.Improvement in fibromyalgia symptoms with acupuncture：results of a randomized controlled trial[J].Mayo Clin Proc，2006，81 （6）：749-757.
[6] Zhang Y，Zhang R X，Zhang M，et al.Electroacupuncture inhibition of hyperalgesia in an inflammatory pain rat model：involvement of distinct spinal serotonin and norepinephrine receptor subtypes[J].Br Jour Anaesth，2012，109（2）：245-252.
[7] Zhang Y，Meng X，Li A，et al.Electroacupuncture alleviates affective pain in an inflammatory pain rat model[J].Eur Jour Pain，2012，16（2）：170-181.
[8]費宏，谢国玺，韩济生.不同频率电针可分别使大鼠脊髓释放甲啡肽和强啡肽[J].基础医学与临床，1986（5）：323-324.
[9]陈启盛，谢翠微，汤健，等.电针对大鼠不同脑区-内啡肽含量的影响[J].科学通报，1983，29（5）：58-61.
[10]孙少丽，韩济生.低频和高频电针通过脊髓中不同的阿片受体发挥镇痛作用：交叉耐受实验[J].针刺研究，1989，14（z1）：143.
[11]任燕华，王玢，罗非，等.不同频率电针对大鼠可卡因条件性位置偏爱效应的影响[J].针刺研究，2001，26（3）：231-232.
[12]侯苗苗，杨洋，李振华，等.电针刺激环跳穴缓解大鼠炎症性疼痛的方法[J].中国医学创新，2015，12（19）：22-24.
[13]汪伟伟，刘菊，蒋雪丽，等.不同伤害性刺激致大鼠痛感觉与痛情绪的比较[J].生命科学研究，2014，18（5）：411-417.
[14]张德玄，邓翌超，沈华.扣带皮层的认知与情感功能分区及其相互作用[J].杭州师范学院学报（医学版），2006，26（5）：331-335.
[15]秦霞，王锐，陈晋源，等.自制带双侧给药管的多通道在体记录电极对前扣带皮层神经元放电活动的观察[J].中国医学创新，2016，13（20）：13-17.
[16] Paxinos G，Watson C.The rat brain in stereotaxic coordinates[J].Elsevier academic press，2007，3（2）：6
[17]张肖怡，兰坤，冯晓璞，等.痛情绪反应量化方法的探索[J].中国医学创新，2014，11（18）：45-48.
[18]高永静，张玉秋，赵志奇.前扣带皮层与痛觉信息加工[J].生理科学进展，2003，34（4）：293-297.
[19] Sikes R W.Vogt B A.Nociceptive neurons in area 24 of rabbit cingulate cortex[J].Jour Neurophysiol，1992，68（5）：1720-1732.
[20] Koyama T.，Tanaka Y Z，Mikami A.Nociceptive neurons in the macaque anterior cingulate activate during anticipation of pain[J].Neuroreport，1998，9（11）：2663-2667.
[21] Johansen J P，Fields H L，Manning B H.The affective component of pain in rodents：direct evidence for a contribution of the anterior cingulate cortex[J].Proc Natl Acad Sci USA，2001，98（14）：8077-8082.
[22]史向党，罗非，崔彩莲，等.电针抑制大鼠吗啡条件性位置偏爱[J].北京大学学报医学版，2003，35（3）：248-251.
[23] Funada， M，Suzuki T，Narita M，et al.Blockade of morphine reward through the activation of kappa-opioid receptors in mice[J].Neuropharmacology，1993，32（12）：1315-1323.
[24] Spyraki C，Nomikos G G，Galanopoulou P Z，et al.Drug-induced place preference in rats with 5，7-dihydroxytryptamine lesions of the nucleus accumbens[J].Behav Brain Res 1988，29（1-2）：127-134.
[25]李振華，杨洋，侯苗苗，等.在体多通道电生理记录技术在大鼠痛情绪研究中的应用[J].中国应用生理学杂志，2016，32（1）：41-45.
（收稿日期：2017-04-10） （本文编辑：程旭然）