摘要： 目的：总结PCR在颈部淋巴结结核诊断中的意义 方法：对162例颈部肿物病例行PCR检查后进行回顾性分析 结果：非结核病例PCR检查结果均为阴性，结核病例均为阳性 结论：PCR在诊断淋巴结结核中具有特殊意义。
结核病除好发于肺部外，在全身各个部位均可发病，如颈部淋巴结，腋窝淋巴结，腹股沟淋巴结，脑膜，胸膜，腹膜，肠道（回盲部），子宫，输卵管，喉，膝，肘，腕关节及脊柱等部位。其中，颈部淋巴结结核在肺外结核中最为常见，颈部淋巴结的诊断，目前有效的确诊方法为1细针穿刺病检2活检病检，由于不能一次性清除病灶，增加病人痛苦及经济负担，且容易发生窦道形成，细菌二次感染，伤口不能愈合等情况，我院自2000年起采取“颈部淋巴结清扫术”治疗该病，现将2016年162例颈部肿物病例行PCR检查结果进行回顾性分析。
1资料与方法
1.1一般资料 162例颈部肿物病例，术前胸部CT检查发现活动性肺结核4例，陈旧性肺结核37例，穿刺活检考虑为结核5例，病检考虑为结核8例，术前确诊率约33.3%，术后病检确诊为结核149例，颈部转移癌2例，淋巴瘤2例，坏死性淋巴结炎3例，淋巴结反应性增生3例，腮腺混合瘤1例，鳃裂瘘2例，所有162病例均行PCR 检查，其中149例结核PCR均为阳性，其余病例为0.
1.2方法 颈部淋巴结结核采取Ⅰ-Ⅴ区淋巴结清扫术，保留胸锁乳突肌，副神经，耳大神经，颈横神经，枕大神经，枕小神经，清扫包括颈浅从神经及颈外静脉在内的其他组织，切除标本送病检，病理科再将可疑标本送PCR检查。
2 讨论：颈部的肿瘤，炎症，畸形等都可表现为颈部肿物，颈部淋巴结炎又包括慢性淋巴结炎和淋巴结结核。今年来，结核发病率有重新回升的趋势，但结核菌侵入人体后，不一定以典型的肺结核形式出现，往往以肺外结核表现，甚至是唯一表现。体表淋巴结结核以颈部肿块为首发症状，无明显午后低热，无结核中毒症状，诊断困难，需行手术诊断。目前外院多以穿刺病检及切除活检做为诊断依据，Chao（2002）认为结核和非结核淋巴结炎的临床表现无明显区别，穿刺对结核性淋巴结炎的敏感性和特异性为88%和96%，亦有报道细针穿刺的敏感性和特异性仅为48%和87.5%，肖淑芬等对10例进行了针吸穿刺活检，敏感度仅为30%，因此对诊断不清的，治疗无效的肿大淋巴结應行切除活检或颈清扫术。我院2016年的162例病例，病理结果中抗酸杆菌染色阳性率低，不足20%；镜下所见，典型的结核结节（中央干酪样坏死，周围巨噬细胞）常不明显，而PCR对所有结核病例均显示阳性，非结核病例显示为0，提示PCR具有明显的敏感性及特异性。
（一）PCR的特异性
PCR特异性的关键首先取决于所选靶序列的特异性.现在常用的靶序列有：①分枝杆菌共有的靶序列，如65-KDa蛋白基因序列；②MTBC特有的靶序列，如MpB64蛋白基因序列、IS6110序列.③人型结核杆菌特异的靶序列，如mpt40序列.引物设计对PCR的特异性也至关重要.引物序列在靶DNA上的专一性、以及引物的特异性和保守性，以及引物本身的许多特性，如G+C含量引物3"未端序列的特异性和保守性及引物长度等都影响PCR的特异性，另外在设计引物时也要防止出现引物间的过多配对，以免形成过多的引物聚合体，造成非特异性扩增.
PCR扩增TB的特异性除上述先决条件外，也与PCR反应本身有极重要的关系.其中退火温度是一个重要因素，退火温度过低时，引物易发生非特异性结合，造成非特异性扩增.由于结核杆DNA中G+C含量高，因此可以适当提高退火温度，以获得更高的特异性.
另外，PCR缓冲液的组成，尤其是Mg2+浓度对PCR的特异性也有较大影响，Mg2+浓度过高，会提高PCR产物的产量，但同时也会增加非特异性扩增.
（二）PCR的敏感性
PCR的敏感性很高，一般可以检测出1～100fg纯化的结核杆菌DNA，相当于1～20个结核杆菌，这种敏感性明显高于涂片法和培养法.PCR还可以检出培养法易发生失败的病例，从而大大提高菌阴结核病的诊断.另外PCR检测TBDNA不受抗痨治疗的影响，可以准确观察抗痨治疗的效果，防止血清学方法所带来的假阴性结果.PCR敏感性受下列因素影响：①扩增靶序列的拷贝数.一般认为，结核杆菌染色体中含靶序列拷贝数越多，PCR敏感性越高，如38-KDa蛋白的基因序列在结核杆菌染色体中只有一个，而IS6110序列的拷贝数却有10～12个，结果PCR敏感性后者比前者高100倍；②PCR的循环次数.在一定程度上，PCR循环次数越多，其敏感性就越高，但要合适.因为，循环次数过多会增加非特异性问题，造成结果判断上的失误，产生假阳性结果；③结核杆菌DNA的提取技术.处理标本时首先要富集（如离心）标本中的TB，使单位体积内TB含量变高，从而增加了起始模板数，有利于提高PCR的灵敏性.同时提取过程要尽可能减少抑制成份，并提高DNA的提取率.④PCR产物的检测方法.虽然DNA探针杂交要比直接电泳法敏感性高得多，但步骤繁琐，这也是影响PCR临床应用的原因之一.但一般情况下，直接电泳法的敏感性完全能够达到检测的需要.
参考文献：
[1]葛明华主编.颈淋巴清扫术.北京：军事医学科学出版社，2009.8.4-5，12
[2]肖淑芬，陶振峰，李晓明，张虹颈部淋巴结结核的手术治疗，临床耳鼻喉科杂志，文章编号1001-1781（2006）03-0140-02.
[3]唐神结，高文. 临床结核病学[M] 北京：人民卫生出版社，2011：478-479.