摘 要：研究绞股蓝黄芪保健茶对小鼠免疫功能的影响。将200只清洁级ICR雌性小鼠，按体重分成免疫5大组，每组随机分成4小组，每小组10只；按人日推荐用量的5倍、10倍、30倍，分别设0.415、0.830、2.490g/kgBw 3个剂量组和蒸馏水对照组。小鼠每天按20mL/kgBW连续灌胃30d后，分别测定小鼠的体重、脏器指数、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬功能以及NK细胞活性。结果表明：样品高剂量组小鼠淋转OD差值、抗体积数、溶血空斑数和碳廓清吞噬指数a都明显高于对照组，经统计，差异均有统计学意义（p<0.05）；高剂量的样品对小鼠的免疫功能有明显的增强作用。
关键词：绞股蓝；黄芪；茶叶；免疫力
中图分类号 R151 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2018）08-0048-04
Effect of Gynostemma Astragalus Health Tea on Immune Function
Yang Sufang1 et al.
（1College of Pharmacy，Fujian University of Chinese Medicine，Fuzhou 350108，China）
Abstract：To study the effect of gynostemma astragalus health tea on immune function in mice. 200 clean grade ICR female mice were divided into 5 groups according to their body weight. Each group was randomly divided into 4 groups with 10 in each group. According to the recommended daily dosage of 5 times，10 times，and 30 times，0.415 ，0.830 and 2.490g/kgBw were set with distilled water control group. The mice were continuously fed with 20 mL/kg BW daily for 30 days. The body weight，organ index，cellular immune function，humoral immune function，monocyte-macrophage function and NK cell activity were measured. The results showed that the OD value，anti-volume number，hemolytic plaque number，and carbon clearance phagocytic index a of the high-dose mice in the high-dose group were significantly higher than those in the control group. Statistically，the differences were statistically significant（p<0.05）. High-dose samples have a significant enhancement of immune function in mice.
Key words：Gynostemma；Astragalus；Tea；Immunity
研究表明，絞股蓝、黄芪富含的多糖、黄酮类、皂苷及茶叶高含量的茶多酚等活性成分都有利于增强机体免疫力，其相关的制剂在免疫治疗中是种很有希望的生物反应调节剂。
绞股蓝始载于《救荒本草》，功善益气健脾，化痰止咳，有“七叶参、赛人参、南方人参”等美誉。实验证实，绞股蓝中6种皂苷和人参皂苷相似，能增强免疫力。如绞股蓝总皂苷（Gyp）能提高正常小鼠淋巴细胞的增殖，促进细胞免疫和体液免疫功能[1]，并对环磷酰胺所致小鼠免疫功能低下有明显拮抗作用，对正常小鼠有一定双向免疫调节作用[2]。绞股蓝多糖对小鼠特异性免疫能力有提高作用[3]，且显著增强Heps小鼠NK细胞活性，提高淋巴细胞转化能力及小鼠血清溶血素含量[4-5]。
黄芪始载于《神农本草经》，本名“黄耆”，具有益气升阳、固表止汗，利水消肿和托毒生肌等功效，为补药之长，经药理结果可得其对体液免疫、细胞免疫均有促进作用。如黄芪能显著增加血白细胞和多核白细胞的数量，提升巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数[6]；黄芪能促进溶血素形成，提高空斑形成细胞的溶血能力，具有比较明显的碳粒廓清作用，增加脾脏重量[7]；常人服用黄芪后，血浆IgM，IgE显著增加[8]；服用黄芪能显著提高淋巴因子（白介素-2）激活的自然杀伤细胞（LAK）的活性[9]。
武夷岩茶始载于《送茶与焦刑部书》，文中名为“晚甘侯”，陈椽在《茶叶商品学》指出：“福建武夷岩茶，温而不寒，提神健胃，消食下气解酒”，性味独特。现代药理探得武夷岩茶属于半发酵茶，富含有效成分茶多酚，从而提高机体总免疫力。茶多酚可以通过提高机体免疫球蛋白总量并使其维持在高水平，刺激抗体活性的变化；提高全血谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力，有助于清除体内生物自由基；使蛋白质凝固而杀菌，保护黏膜；提高刀豆球蛋白A（ConA）刺激脾淋巴细胞增殖反应，抑制N-甲基-N-硝基-N-亚硝基胍（MNNG）诱发肠道恶性肿瘤等 [10-12]。
本实验以绞股蓝为主要原料，配以适量的黄芪、茶叶，通过对小鼠免疫调节功能试验研究，为绞股蓝系列保健品开发、推广提供理论支撑。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验样品及配制 实验样品绞股蓝黄芪保健茶由福建杰特生物科技有限公司提供，具体配制比例为：绞股蓝50%、黄芪25%、武夷岩茶25%。使用前称取样品450g加入10倍量的蒸馏水，在85℃常压下浸泡30min，过滤，重复上述操作1次，合并滤液，于65℃减压浓缩至3L，每毫升含样品0.15g。量取样品提取浓缩液100mL混匀作为高剂量组样品；量取高剂量组样品40mL加蒸馏水至120mL混匀作为中剂量样品；量取中剂量组样品40mL加蒸馏水至80mL混匀作为低剂量样品。
1.1.2 实验动物 选用福建医科大学实验动物中心提供的3周龄清洁级ICR雌性小鼠200只，体重范围为18～21g，动物合格证号：SCXK（闽）2012-0001。
1.1.3 仪器 8mm直径打孔器（上海善久自动化技术有限公司）、微量血凝试验板（上海古朵生物科技有限公司）、2-16K通用离心机（上海精密仪器仪表有限公司）、MODEL680酶标仪（上海古朵生物科技有限公司）、96孔培养板（上海凌初环保仪器有限公司）、Co-150C02培养箱（上海精密仪器仪表有限公司）、UV-1800紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器责任有限公司）、OLympusIX71倒置显微镜、显微镜（河南郑州南北仪器设备有限公司）、BS224S电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）。
1.1.4 试剂 注射用印度墨汁、刀豆蛋白A（ConA）、MTT、DNFB、丙嗣、麻油、SRBC、生理盐水、鸡红细胞、羊红细胞、甲醇、Giemsa染液、YAC-1细胞、Hank"s液（PH7.2-7.4）、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、典硝基氯化四氮唑（INT）、吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）、NAD、Tris-HCL缓冲液（PH8.2）、1%NP40、台酚兰、lmoL/L盐酸、酸性异丙醇等（上海笛柏化学品技术有限公司）
1.2 方法 该样品成人日推荐用量为5.0g，即0.083g/kgBW（成人体重以60kg计）。小鼠按体重分成五大组，分别为：免疫一组，测定空斑、溶血素、脏器指数；免疫二组，进行小鼠NK活性、淋转试验；免疫三组，进行小鼠DTH试验；免疫四组，进行小鼠碳廓清试验；免疫五组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。每大组待试验小鼠按体重随机分成4小组，每小组10只，按人日推荐量的5倍、10倍、30倍，分别设0.415、0.830、2.490g/kgBw 3个剂量组和蒸馏水对照组。小鼠每天按20mL/kgBW连续灌胃30d后，分别进行以下项目的试验。
碳廓清实验、迟发型变态反应（DTH）、抗体生成细胞和血清溶血素、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）和脏器/体重比值以及ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定按规范方法[13]进行；实验数据统计方法：实验数据以SPSS软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSP法进行统计分析，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。
2 结果与分析
2.1 样品对小鼠体重的影响 各组小鼠的体重均增长，但与对照组比较，差异均不显著（p>0.05），结果如表1。
2.2 样品对小鼠脏器/体重比值的影响 各剂量组胸腺指数、脾脏指数与对照组比较均无显著性差异（P>0.05），结果见表2。
2.3 样品对正常小鼠细胞免疫功能的影响
2.3.1 样品对ConA诱导的正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响 高剂量组淋巴细胞增殖明显高于对照组，差异显著（P<0.05），结果见表3。
2.3.2 样品对正常小鼠迟发型变态反应水平（DTH）的影响 与对照组相比，样品各剂量组对小鼠迟发型变态反应水平无显著性差异（p>0.05），结果见表3。
2.4 样品对正常小鼠体液免疫功能的影响
2.4.1 对正常小鼠血清溶血素的影响 高剂量组抗体积数明显高于对照组，差异显著（p<0.05），结果见表3。
2.4.2 对正常小鼠抗体生成细胞的影响 高剂量组小鼠溶血空斑的数量明显高于对照组，差异显著（P<0.05），结果见表3。
2.5 样品对正常小鼠单核-巨噬细胞功能的影响
2.5.1 对正常小鼠碳廓清的影响 高剂量组小鼠的碳廓清吞噬指数a明显高于对照组，差异显著（P<0.05），结果见表4。
2.5.2 对正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响 各剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率和吞噬指数与对照组比较，差异不显著（P>0.05），结果见表4。
2.6 对正常小鼠NK细胞活性的影响 高剂量组NK细胞活性明显高于对照组，差异显著（p<0.05），结果见表4。
3 讨论
免疫一词我国最早出现于明朝《免疫类方》，是指“免除疫疠”的意思，与中医的“祛邪”寓意相通。中医认为，正气强弱是决定人体发病御病的最基本因素，故《黄帝内经》曰：“正气存内，邪不可干”，经过补充人体阴阳、气血、津液等不足，增强人体免疫功能[14]以实现《黄帝内经》之“未病先防，既病防变”，即所谓“扶正”能“祛邪”。
纵观功效，绞股蓝、黄芪皆补脾益肺、武夷岩茶温中健脾，三药都能补脾益气，属于中医的增效配伍。剖析成分，实验样品以绞股蓝为主要原料，配以黄芪、茶叶，多种活性成分因子协同发挥，从而达到增强机体免疫力的保健效果[15-16]。
免疫器官包括中枢免疫器官和外周免疫器官。前者包括胸腺和骨髓，后者包括脾、淋巴结、消化道、呼吸道和泌尿生殖道淋巴结。免疫器官的发育将直接影响机体的免疫功能[17]。本实验分别进行了碳廓清测定、迟发型变态反应（DTH）检测、抗体生成细胞和血清溶血素测定、抗体生成细胞检测、血清溶血素的测定、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）和脏器/体重比值、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验和小鼠NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶LDH测定法）、ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、小鼠NK细胞活性测定（乳酸脱氢酶LDH测定法），实验结果高剂量的样品对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力、体液免疫、NK细胞活性、小鼠碳廓清能力等方面均有增强作用，实验结果全面可信。
综上所述，高剂量的绞股蓝黄芪保健茶样品对小鼠多个免疫功能具有良好的增强作用，提示该配方产品具有增强机体免疫力功能，同时很好地体现传统中医扶正治疗的原则。
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（責编：王慧晴）