摘 要 目的：探讨通络玉液汤对糖尿病心肌病大鼠心肌的保护作用及其机制。方法：采用高糖高脂饮食+小剂量链脲佐菌素腹腔注射的方法复制2型糖尿病心肌病大鼠模型。将48只大鼠随机分为4组：正常对照组、糖尿病心肌病组、苯纳普利对照组、通络玉液汤组。分别处理8周后，测定大鼠FBG、血清中MDA、LDH、CK含量及SOD活性的改变，左室重量指数和心脏重量指数的变化，观察心肌细胞的病理形态。结果：与糖尿病心肌病组比较，通络玉液汤组大鼠FBG、MDA、LDH、CK含量水平明显下降（P<0.01）， SOD活性明显上升（P<0.01），左室重量指数和心脏重量指数明显下降（P<0.01）。结论：通络玉液汤可降低血糖，清除
氧自由基、改善糖尿病心肌病心肌损伤。
关键词 通络玉液汤 2型糖尿病心肌病 心肌酶 抗氧化
Abstract Objective： It is to explore the protective effect and possible mechanisms of TongluoYuye Decoction（TYD） in rats with diabetic cardiomyopathy（DC）. Methods： Experimental rat model of type 2 diabetic cardiomyopathy was constructed by high sucrose-high fat diet and low dose streptozotocin peritoneal injection. 48 rats were randomly divided into four groups： normal group， DC group， Benazepril（BP） group， TYD group. After eight weeks， FBG， LDH， CK， MDA and SOD in serum are determined， LVMI and HWI were detected，the pathological change of myocardial cell is observed. Results： compared with DC group， FBG， LDH， CK， MDA of TYD groups decreased significantly （P<0.01）， SOD increased significantly （P<0.01， P<0.05）. LVMI and HWI decreased significantly （P<0.01）.Conclusion： TYD can reduce glucose， clear oxygen radicals， improve myocardial damage.
Keywords TongluoYuye Decoction； type 2 diabetic cardiomyopathy； myocardical Enzyme； antioxidat
近年来，随着社会经济的飞速发展，公众调整了自身生活方式、饮食结构，导致糖尿病发病率逐年升高，而糖尿病心肌病（DC）是糖尿病患者的主要并發症及死亡原因，目前已成为对人类健康造成严重威胁的全球性公共卫生问题。[1，2]本实验通过给以大鼠高糖高脂饲料+腹腔注射小剂量链脲佐菌素复制实验性2型糖尿病心肌病模型，以通络玉液汤为治疗药物，贝那普利作为阳性对照，观察糖尿病心肌病大鼠相关指标的变化，探讨通络玉液汤对DC 大鼠心肌的保护作用及其可能机制，为其防治和延缓糖尿病心肌病的发生、发展提供可靠的实验和理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
通络玉液汤（生晒参、生黄芪等十二味中药组成）中药饮片均购自沧州同仁堂药店。浸泡，煎煮、浓缩成2.5g生药/ml的液体；盐酸苯那普利片（商品名：洛汀新），北京诺华制药有限公司生产；链脲佐菌素（STZ），购自美国 Sigma 公司； 血糖（GLU）、肌酸激酶（CK） 、乳酸脱氢酶（ LDH） 、丙二醛（ MDA） 、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒均购自南京建成生物制品研究所。
1.2 造模与分组
48 只 SD雄性大鼠，SPF 级，体重 150～180 g，购自中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所动物实验中心，合格证号：SCXK-（军）2009-003。将大鼠进行1 周的适应性喂养后开始实验，根据预实验结果，同时参考董世芬等方法[3]复制糖尿病心肌病模型，将48只大鼠随机分为正常对照组（ NC 组） 和模型组。36只模型组大鼠全部采用高脂高糖饲料喂养，4周后，完成1% STZ30 mg /kg一次性腹腔注射，72 h 后测空腹血糖（ FBG），以FBG浓度大于11.1 mmol/L确认是 2 型糖尿病模型复制成功的标准，成模大鼠继续采用高脂高糖饲料喂养 6 周，即成DC模型。选择成模大鼠36 只，随机分为3组：苯那普利对照组（Benazepril，BP组），糖尿病心肌病组（DC组），通络玉液汤组（TYD组），每组数量均为12只。NC 组大鼠一直采用基础饲料喂养，等量枸橼酸钠缓冲液（pH=4.4）代替STZ腹腔注射，不采血。
1.3 给药方法
DC 模型成功后开始用药。BP组：灌服苯那普利 1mg/kg·d；TYD组：灌服通络玉液汤 25g/Kg·d，； NC组和DC组大鼠灌服生理盐水，连续灌服8周。
1.4 血生化指标测定
结束用药后4组大鼠全部禁食不禁水 12h由颈总动脉取血2ml， 凝固，2000r/min离心，分离血清，空腹血糖（FBG）采用葡萄糖氧化酶法测定，乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、MDA、SOD全自动生化分析仪测定。
1.5 计算左室重量指数和心脏重量指数
大鼠开胸快速取出心脏，用 4℃预冷生理盐水冲洗后称量心脏、左心室重量，大鼠左心室重量（mg）/体重（g）=左室重量指数（LVMI），心脏重量（mg）/体重（g）=心脏重量指数（HWI）。
1.6 心肌组织形态学检查
取心肌组织放入4%多聚甲醛缓冲液中固定，制成蜡块，切片，进行 HE染色，光镜观察心肌组织形态变化。
1.7 统计学处理
所有数据采用SPSS 16.0统计软件分析，全部数据均用均数€北曜疾畋硎荆阶榧浔冉喜捎胻检验，多组间的比较用单因素方差分析法，以P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 TYD对糖尿病心肌病大鼠血糖、心肌酶的影响
与NC组比较，DC组大鼠空腹血糖、血清中LDH、CK含量明显升高（P<0.01）；经用药干预后，各治疗组大鼠血清中LDH、CK含量及TYD组大鼠空腹血糖明显降低，与DC組比较有显著差异（P<0.01）；与BP组比较，TYD组大鼠空腹血糖、血清中LDH、CK含量明显降低（P<0.01）（见表1）。
2.2 TYD对糖尿病心肌病大鼠血清SOD活性、MDA水平的影响
DC组大鼠与NC组相比血清MDA水平明显升高（P<0.01），SOD活性明显下降（P<0.01）；TYD组和BP组大鼠与DC组比较血清中MDA水平明显降低， SOD活性明显升高，差异有统计学意义 （P<0.01）； TYD组大鼠与BP组比较血清MDA水平明显降低（P<0.01），SOD活性明显上升（P<0.05）（见表2）。
2.3 TYD对糖尿病心肌病大鼠LVMI 及 HWI的影响
与NC组比较，DC组大鼠LVMI 及 HWI明显升高（P<0.01）；经用药干预后，各治疗组大鼠LVMI 及 HWI明显降低，与DC组比较有显著差异（P<0.01，P<0.05）；与BP组比较，TYD组大鼠LVMI 及 HWI明显降低（P<0.01）（见表3）。
2.4 各组大鼠心肌组织的病理学变化
光镜下观察：NC组大鼠心肌纤维排列整齐，结构清晰，形态正常，细胞外间质较少，可见少量成纤维细胞。DC组大鼠心肌纤维排列紊乱，心肌细胞肿胀、变性，局灶性坏死，细胞间隙增大，可见成纤维细胞增生，并有炎细胞浸润；TYD组和BP组大鼠心肌细胞边界清楚，结构基本正常，纤维紊乱和细胞肿胀明显减轻。
3 讨论
大量研究表明，长期高血糖刺激，诱导氧化应激反应，使高活性的自由基过量产生，促使心肌细胞坏死，心肌细胞外基质合成增多，引起心肌纤维化，左室重构和心肌肥厚，进而影响了心脏正常功能，诱发心力衰竭，最终导致糖尿病心肌病的发生。[4]临床上评价心肌损伤最常用的指标是心肌酶。心肌细胞损伤时，大量肌酸激酶（CK）从心肌细胞中渗出，可引起血清中CK含量升高，浓度越高，表明心肌损伤越严重。研究结果显示：模型组大鼠血清中CK、乳酸脱氢酶（LDH）、MDA含量明显升高，SOD活性明显降低，表示在长期的高血糖刺激下，生成了大量氧自由基，引起了细胞膜中的脂质过氧化反应，导致心肌损伤。
中医学对糖尿病心肌病并无专门记载。医家历来将其归于“消渴”、“胸痹”等范畴。消渴病长久不愈，肺脾肾阴虚燥热，不断耗气伤阴，病久累及于心，心体受损，气虚血液运行无力，心脉被瘀血阻滞，引发糖尿病心肌病。
通络玉液汤由生晒参、生黄芪等十二味中药组成，由经典方剂玉液汤、生脉散加减化裁得来，可行益气养阴、活血通络之功。 本实验显示，通络玉液汤组大鼠血清FBG、MDA 、LDH、CK水平明显低于模型组大鼠，SOD活性也明显升高，LVMI 及 HWI明显降低，说明通络玉液汤能减轻脂质过氧化反应，减少心肌酶的释放，减轻了糖尿病心肌病大鼠的心肌损伤，对心肌具有保护作用。本实验结果为通络玉液汤防治和延缓糖尿病心肌病的发生、发展提供了可靠的实验和理论依据。
€L鼙狙芯课？013年沧州市科学技术研究及发展指导计划项目 课题编号：131302077
参考文献
[1] 吴铿，游琼，黄瑞娜，等.柚皮苷对实验性 2 型糖尿病心肌病大鼠模型糖脂代谢的影响[J].广东医学，2012.33（13）：1863-1865.
[2] Voulgari C，Papadogiannis D，Tentolouris N.Diabetic cardiomyopathy：from the pathophysiology of the cardiac myocytes to current diagnosis and management strategies[J]. Vasc Health Risk Manag，2010：6883-903.
[3] 董世芬，洪缨，樊江波，等.实验性2型糖尿病心肌病大鼠模型的建立与评价[J].中国实验动物学报，2009.17（4）：245-251.
[4] Watanabe K，Thandavarayan RA，？Harima M，et al. Role of differential signaling pathways and oxidative stress in？diabetic cardiomyopathy[J].Current cardiology reviews，2010.6（4）：280-90.