摘 要：从药用植物苦参的茎、叶中分离得到10种内生真菌，并对这几种内生真菌杀菌活性进行筛选，获得高拮抗性菌株。
关键词：苦参；内生真菌；杀菌活性
中图分类号：R282.71 文献标识码：A
1实验材料与方法
1.1实验材料
1.1.1 待测菌株
分离得到的苦参内生真菌纯化培养2周后使用（表1）。
1.1.2 测试菌
人参黑斑病原菌（Alternaria panax Whetz.），简称RS-hb
人参疫病病原菌（Phytophthora cactorum Schroet.），简称RS-yb
人参灰霉病原菌（Botrytis cirerea），简称RS-hm
人参立枯病原菌（Rhizoctonia solani Kuhn），简称RS-lk
新月弯孢霉（Curvularia lunata），简称新月弯
毛霉（Mucor mucedo（L.）Brefeld），
1.1.3 培养基
真菌培养基：PDA固体培养基，马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水l000ml
pH值自然。
1.2 实验方法
两点对峙培养法[1] 用记号笔在9cm直径的PDA平板背面标记两点，使其分布在同一直径上各距培养皿边缘1.5cm处，分别切取25℃恒温培养7日龄，菌块直径均为1cm的內生菌和病原菌菌丝块，接种于标记的两个点上，于27℃恒温培养箱中培养，逐日观察记测。上述处理均设3个重复，并以接內生真菌菌块和PDA组织块，接病原菌菌块和PDA组织块作对照[2]。每日测量内生真菌菌落指向病原菌的趋向半径和病原菌菌落指向内生真菌的趋向半径，二者对照半径。当两菌落相交后，观察并记录两菌落间相互抑制，侵入和占领对方营养空间的过程。并按下述公式计算抑制率和抑制效果：
2 结果和讨论
2.1对峙培养结果
采用两点法对分离获得的植物内生真菌与供试病原菌进行对峙培养。苦参内生真菌对供试病原菌的抑菌效果见表2、表3、表4、表5、表6、表7、表8。
由表2可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌人参黑斑病原菌的对峙培养中，有5株内生真菌的相对抑菌效果达到了1.00以上，证明这5株内生真菌对人参黑斑病原菌的生长有抑制作用[3]。尤其是菌株KSJ05的相对抑菌效果达到了11.40，说明其对人参黑斑病原菌有极强的抑制能力。另外还有4株内生真菌KSY06、 KSJ02、 KSJ03 、KSJ06的相对抑菌效果分别达到了1.12、1.2、1.13、1.11。
由表3可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌人参灰霉病原菌的对峙培养中，从苦参中分离的7株内生真菌对人参灰霉病病原菌有强烈抑制作用。尤其是菌株KSJ05的相对抑菌效果达到了16.75，说明其对人参黑斑病原菌有极强抑制能力。
由表4可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌人参立枯病原菌的对峙培养中，有5株内生真菌的相对抑菌效果达到了1.00以上，证明这5株内生真菌对人参立枯病原菌的生长有抑制作用。尤其是菌株KSJ05的相对抑菌效果达到了32.19，说明其对人参黑斑病原菌有极强的抑制能力。另外还有4株内生真菌KSY01、KSY04、KSY05、KSJ03的相对抑菌效果分别达到了1.01、1.11、2.08、1.06。
由表5可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌人参疫病病原菌的对峙培养中，有3株内生真菌的相对抑菌效果达到了1.00以上，证明这3株内生真菌对人参疫病病原菌的生长有抑制作用。尤其是菌株KSJ05的相对抑菌效果达到了14.56，说明其对人参疫病病原菌有极强的抑制能力。另外还有2株内生真菌 KSY06、KSJ06的相对抑菌效果分别达到了1.19、1.08。
由表6可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌毛霉菌的对峙培养中，有7株内生真菌的相对抑菌效果达到了1.00以上，证明这7株内生真菌对毛霉菌菌丝生长有抑制作用。尤其是菌株KSJ05的相对抑菌效果达到了3.58，说明其对毛霉菌有极强的抑制能力。另外还有6株内生真菌KSY01、KSY05、KSY06、KSJ02、KSJ03、KSJ06相对抑菌效果分别达到了2.22、1.08、2.63、1.14、1.29、1.94。
由表7可看出，苦参内生真菌在与供试病原菌新月弯孢霉的对峙培养中，有3株内生真菌的相对抑菌效果达到了1.00以上，证明这3株内生真菌对新月弯孢霉生长有抑制作用。但是没有一株内生真菌对其表现出了极强的抑菌效果。
由表8可知，菌株KSJ05对供试病原菌的相对抑菌效果更强，尤其是对人参立枯病菌，人参灰霉病菌，人参疫病病菌的相对抑菌效果分别达到了32.19，16.75和14.56。
2.2讨 论
皿内检测作为有效筛选生防菌的一种重要方法，具有检测简便、快捷的特点。但皿内检测结果与活体试验相关性的不稳定，在很大程度上限制了这种方法的使用。本文在以皿内对峙法初步确定了待测菌株抑菌效果的基础上，筛选出了苦参KSJ05高拮抗活性菌株。
参考文献
[1]于文喜等.木霉拮抗立枯丝核菌株的筛选[J].林业科技，1999，24（06）：23-25.
[2]兰琪，姜广华，吴文君.农用植物内生真菌研究进展[J].世界农药，2002，44（24）：10-11.
[3]段琦梅，幕小倩，安德荣，等.S2159206菌株活性产物对植物病原菌的抑菌谱及拮抗机理初探[J].西北植物学报，2004，24（06）：1088-1092.