摘要：大鼠肾移植模型是肾脏相关疾病研究中常用的动物模型，目前已有多种建模方式，但最主要的问题是术中血管吻合技术。目的 总结大鼠肾移植术后预防血栓形成的手术经验,减少术后血管并发症的发生。方法 回顾性分析2010年1月~2013年12月60例大鼠肾移植手术,术中通过改进血管游离等方面的手术技巧来预防移植肾血管并发症的发生。结果60例大鼠肾移术后无1例出现吻合口狭窄及肾动脉血栓形成或栓塞。结论 采用适当、熟练的手术技巧可以减少大鼠肾移植术后血管并发症的发生。
关键词：大鼠肾移植；血栓形成；血管吻合；血管并发症1资料与方法
1.1一般资料实验手术过程中对动物的处置符合《贵阳医学院实验动物研究所伦理审查指南》。供受体均选用成年SD2大鼠各60只，鼠龄2~3个月，所有大鼠均为成年雄性，体重200~250g，由贵阳医学院动物实验研究所提供。
1.2药品、器械肝素、生理盐水（500/mL）、平衡液、自助置肾袋、8-0 无损伤缝线5-0 无损伤缝线、自制腹腔、血管拉钩。
1.3方法供、受体大鼠均在移植前禁饮食6h,可以饮水,行（经腹腔注射Nacroren、肌肉注射Ketanest）麻醉。
1.4供鼠移植行（经腹腔注射Nacroren、肌肉注射Ketanest）麻醉。常规剔除腹部鼠毛并尽量不伤及皮肤，如果皮肤有伤口会会引起术后伤口感染。将大鼠除头部以外，络合碘消毒全身手术区域，铺无菌巾，手术洞巾。取SD大鼠腹部皮肤正中作为手术切口。以回形针拉直后自制的腹腔拉钩，将腹壁垂直伤口拉开,充分显露腹部内脏器官及左肾，避免周围脏器（肝、脾）损伤，不损伤胸膜腔。以0.9%生理盐水纱布将腹部肠管包裹推向右侧以伤口减少大鼠体液丧失。供体大鼠在分离左肾及肾静脉及周围组织时要轻柔，避免损伤肾静脉血管鞘。游离左肾动脉时，临近腹主动脉一定要用5-0带针缝合线逐一缝在、结扎各个分支血管，避免因出血而造成血管痉挛、大出血、血栓形成等不可逆性损伤导致大鼠死亡。游离肾脏时，应紧贴肾脏避免周围脂肪过度牵拉，操作粗暴会导致肾血管痉挛、大出血致肾缺血而坏死。处理肾上腺血管时，尽量带一点肾上腺组织并作为其肾上的标记，避免在受体肾移植时肾上极颠倒导致手术失败。总的来讲游离大鼠左侧肾上腺动、静脉、左侧精索动、静脉、应逐个结扎、切断。钝性游离肾脏的背侧、上极、下极； 游离腹主动脉，特别要注意其后方存在1-2根椎动脉，应予以一并结扎切断。将此段腹主动脉与下腔静脉及左肾静脉完全分离；左输尿管应从大鼠腹主动脉游离并切断，以5-0带针可吸收线结扎备用。输尿管周围的脂肪组织是维持输尿管血供的主要来源，在游离输尿管时这些脂肪组织应尽量多保留，以免术后输尿管坏死。用文氏钳在左肾动脉上方（离肾动脉约0.5cm）阻断大鼠腹主动脉，迅速以0℃~5℃肝素钠生理盐水2mL低压、匀速灌洗大鼠左肾，可见左肾色泽逐渐转为均匀的浅淡黄色时切断左肾静脉，再以0℃~5℃肝素钠生理盐水2mL低压、匀速灌洗肾脏，以去除左肾静脉内残留血液。于左肾动脉上方紧贴腹主动脉处5-0带针可吸收线结扎、缝扎肾动脉，这时供肾切取完成。切取的肾脏立即放入0℃~5 ℃平衡液中。在取供体大鼠左肾时，冷缺血时间、热缺血时间应缩短。本组60例大鼠肾移植实验表明，供体肾当温度大于5℃，冷藏时间在大于12h时，大鼠肾移植术后会产生少尿、肾功能衰竭；大于16 h 移植肾丧失功能，受体死亡。
1.5受体移植大鼠麻醉行经腹腔注射Nacroren、肌肉注射Ketanest， 常规剔除腹部鼠毛并尽量不伤及皮肤，如果皮肤有伤口会会引起术后伤口感染。将大鼠除头部以外，络合碘消毒全身手术区域，铺无菌巾，手术洞巾。取SD大鼠腹部皮肤正中作为手术切口。以回形针拉直后自制的腹腔拉钩，将腹壁垂直伤口拉开,充分显露腹部内脏器官及左肾，避免周围脏器（肝、脾）损伤，不损伤胸膜腔。以0.9%生理盐水纱布将腹部肠管包裹推向右侧以伤口减少大鼠体液丧失。游离大鼠左肾及肾脏周围组织，游离左侧输尿管，游离暴露左肾静脉下方的腹主动脉和下腔静脉，血管钳阻断约1.5cm的该段动静脉取出供肾，置于自制肾袋内。以往手术证明，端侧吻合肾动脉时，手术时间会明显延长，大鼠腹主动脉和下腔静脉被夹闭，会导致受体器官缺血再灌注损伤。夹闭时间越长会导致供肾缺血再灌注损伤增大。相反，肾动脉血管的端端吻合对受体器官的损伤较小，明显缩短手术时间。本人认为使用保留尽可能长的供肾动脉于腹主动脉端端吻合、供肾静脉与受体大鼠腔静脉端侧的吻合，术后效果最好，是一种最稳定的肾移植模型。
1.6吻合方法在双人显微镜下，用8-0无损伤缝线缝合供肾动脉两个点(3，9点），助手牵拉两条缝合线，前后面8-0无损伤缝线连续缝合行肾动脉和腹主动脉残端，端端吻合。缝合时血管夹夹闭腹主动脉防止管腔狭窄，漏血形成血栓。 然后用0℃~5℃肝素钠生理盐水冲洗供肾肾静脉，使肾静脉置入自然位置再行吻合，以免误缝前后壁。剪开受体大鼠腔静脉，尽量离供肾肾静脉位置旁边，8-0无损伤缝线缝合肾静脉两个点(3，9点）和腔静脉端侧吻合。吻合静脉时助手牵拉两点锋线，不要牵拉过猛。牵拉过猛会导致缝线滑脱造成手术和肾缺血时间过长影响肾功能的恢复。不要反复牵拉血管以免内膜损伤造成术后血栓形成。牵拉两点血管后，8-0无损伤缝线连续缝合牵拉点的前后血管。吻合血管时不要将血管前后壁夹闭导致手术失败。
1.7尿路重建使用5-0 无损伤缝线输尿管端端吻合，间断吻合4～6针。
1.8摘除受体原右侧肾脏方法同供体左肾切除术，游离受者右肾时5-0 无损伤缝线结扎肾蒂，不用考虑输尿管的血供及肾脏周围血管的分离。较为简单，切除时间较短。
2结果
60例大鼠肾移植术后均未出现血管吻合口处狭窄及肾动脉血栓形成,肾动脉栓塞等血管并发症。术后每天监测大鼠受体肾功均在正常范围。受体及供体伤口按时换药1次/d，均未出现伤口感染。采用适当的手术技巧和熟练的外科手术技能，可以大大减少大鼠肾移植术后血管并发症的发生。
参考文献：
[1]Ding R,Xie YS,Chen XM[J]．Zhonguo Zhongxiyi Jiehe Shenbing Zazhi,2008,9(4):365-367.
[2]Zhang JP, Zhang HJ, Wang X, et al[J]．Fudan Xuebao: Yixue Ban,2007;34(4):595-598.
[3]Wang K, Dai Y, Li DP, et al.Zhonghua Qiguan Yizhi Zazhi,2006,27(1):54-56.
[4]李默生,曹伟,靳风烁.临床肾移植围手术期治疗学[M].军事医学科学出版社, 2006: 197-198.
[5]李嫣唐,张玉梅. 新世纪肾脏移植学[M]. 军事医学科学出版社,2001:288.
[6]李定宪，祝峰，胡有根.大鼠原位肾移植模型血管吻合方法的改进[J].中华实验外科杂志, 2012，8:1635-1636.
[7]麦海星．大鼠肾移植模型建立方法的探讨[J]．第四军医大学学报，2007，23：2202-2203．
编辑/哈涛